B16-F10細(xì)胞小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)細(xì)胞
1) 來源:蒂科生物細(xì)胞庫
2) 形態(tài):貼壁 上皮樣和紡錘形混合
3) 含量:>1x106 個/mL
4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
5) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
6) 運(yùn)輸:順豐發(fā)貨
培養(yǎng)條件:
培養(yǎng)基:DMEM(H)+10%FBS(推薦HAKATA貨號:HN-FBS-500)
溫度:37℃ 氣相:95%空氣,5%二氧化碳
傳代:
1.用75%酒精噴灑整個培養(yǎng)瓶消毒,將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行1-3小時的緩沖,.然后置于無菌操作臺,打開瓶口,將其中的培養(yǎng)液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進(jìn)行換液以及傳代,一般2到3天換一次液;
2.待細(xì)胞長滿瓶底面積80%-90%,需要對其進(jìn)行傳代,傳代比例為1:2到1:4;
3傳代步驟:將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預(yù)熱,倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml PBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預(yù)熱好的胰酶,置于37°孵育消化(diyi次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察,以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細(xì)胞脫落為zuijia消化時間,記錄zuijia消化時間,以便于下次消化),消化好后加入3ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之*脫落,然后收集細(xì)胞懸液,1200rpm離心3min,棄上清,加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,進(jìn)行傳代。
凍存:
建議使用本公司無血清細(xì)胞凍存液貨號:H-W-100,用4度保存的冷凍液直接重懸細(xì)胞,不能預(yù)熱后使用。
保存條件:液氮存儲
溫馨提示:(常見問題,處理方式)
T25瓶為例;
1.細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。
3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注:diyi次傳代推薦傳代比例為1:2,以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。
細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
熱銷細(xì)胞:
H031 NCI-H1299 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 RPMI1640+10%FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H032 PANC-1 人胰腺癌細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H033 RBE 人肝膽管癌細(xì)胞 DMEM+10%FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H034 SAOS-2 人成骨肉瘤細(xì)胞 McCoy's 5A+15%FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H035 SiHa 人子宮頸鱗癌細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H036 NB 4 急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 懸浮 圓形
H037 SPC-A-1 人肺腺癌細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H038 SW480 人結(jié)腸癌細(xì)胞 L-15+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H039 U-87MG 人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H040 ZR-75-1 人乳腺癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H041 SW1116 人結(jié)腸腺癌細(xì)胞 L-15+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H042 293A 人胚腎細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H043 SGC-7901 人胃腺癌細(xì)胞 RPMI-1640 +10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H044 Ishikawa 人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H045 Eca-109 人食管癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H046 RD-ES 人尤文氏肉瘤 RPMI-1640+15% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H047 NCI-H1437 人肺癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H048 HOS 人骨肉瘤細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H049 Hela S3 人宮頸癌細(xì)胞 F12K+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H050 ECC1 人宮頸內(nèi)膜腺癌細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H051 SUP-B15 人Ph+急淋白血病細(xì)胞系 IMDM+20% FBS 懸浮 淋巴母細(xì)胞樣
H052 TF-1 人血液白血病細(xì)胞 RPMI1640+ 10% FBS+2ng/mL 重組人GM-CSF 懸浮 淋巴母細(xì)胞樣
H053 NCI-H446 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H054 GES-1 人胃正常黏膜上皮細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H055 IOSE80 人卵巢正常上皮細(xì)胞株 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H056 GIST882 人胃腸道間質(zhì)瘤細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H057 KGN 人卵巢顆粒細(xì)胞癌 DMEM/F12(1:1)+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H058 U937 人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞 RPMI-1640 +10% FBS 懸浮 單核細(xì)胞樣
H059 SV-HUC-1 人膀胱上皮永生化細(xì)胞 F12K+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H060 tpc-1 人乳頭瘤狀甲狀腺癌細(xì)胞 F12K+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H061 hela-luci Luciferase穩(wěn)定表達(dá)Hela細(xì)胞 DMEM(L)+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H062 colo320 人結(jié)腸癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 半懸浮 圓形
H063 bxpc-3 人胰腺腺癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H064 raji 人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 懸浮 淋巴母細(xì)胞樣
H065 5637 人膀胱癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H066 chang-liver 人肝細(xì)胞(已被hela污染) DMEM(L)+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H067 a549-gfp gfp標(biāo)記的A549細(xì)胞 F12K+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H068 hs578.t 人乳腺癌細(xì)胞 DMEM+10% FBS+10μg/ml 胰島素 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H069 T24 人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞 McCoy's 5A+15%FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
B16-F10細(xì)胞小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)細(xì)胞