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激光共焦顯微鏡的工作原理分析

閱讀:1440發(fā)布時(shí)間:2017-9-5

   激光共焦顯微鏡的工作原理分析
  激光共焦顯微鏡基于模塊化概念而設(shè)計(jì),可集成多種功能,不僅包括納米技術(shù),還可靈活升級(jí)到受激發(fā)射損耗系統(tǒng)(STED)。更有超高分辨率激光掃描共聚焦顯微鏡,激光共焦顯微鏡采用*光學(xué)技術(shù),滿足您對(duì)分辨率的高要求。激光共焦顯微鏡是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)具有劃時(shí)代意義的高科技新產(chǎn)品,是當(dāng)今世界的細(xì)胞生物學(xué)分析儀器。激光共焦顯微鏡是在熒光顯微鏡成象的基礎(chǔ)上加裝激光掃描裝置,使用紫外光或可見(jiàn)光激發(fā)熒光探針,利用計(jì)算機(jī)進(jìn)行圖象處理,對(duì)生物樣品進(jìn)行定性、定量、定時(shí)和定位研究。激光共焦顯微鏡已廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、生理學(xué)、病理學(xué)、解剖學(xué)、胚胎學(xué)、免疫學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)等領(lǐng)域。
  激光共焦顯微鏡利用激光束經(jīng)照明針孔形成點(diǎn)光源對(duì)標(biāo)本內(nèi)焦平面的每一點(diǎn)掃描,標(biāo)本上的被照射點(diǎn),在探測(cè)針孔處成像,由探測(cè)針孔后的光電倍增管(PMT)或冷電耦器件(cCCD)逐點(diǎn)或逐線接收,迅速在計(jì)算機(jī)監(jiān)視器屏幕上形成熒光圖像。照明針孔與探測(cè)針孔相對(duì)于物鏡焦平面是共軛的,焦平面上的點(diǎn)同時(shí)聚焦于照明針孔和發(fā)射針孔,焦平面以外的點(diǎn)不會(huì)在探測(cè)針孔處成像,這樣得到的共聚焦圖像是標(biāo)本的光學(xué)橫斷面,激光共焦顯微鏡克服了普通顯微鏡圖像模糊的缺點(diǎn)。
  激光共焦顯微鏡利用放置在光源后的照明針孔和放置在檢測(cè)器前的探測(cè)針孔實(shí)現(xiàn)點(diǎn)照明和點(diǎn)探測(cè),來(lái)自光源的光通過(guò)照明針孔發(fā)射出的光聚焦在樣品焦平面的某個(gè)點(diǎn)上,該點(diǎn)所發(fā)射的熒光成像在探測(cè)針孔上,該點(diǎn)以外的任何發(fā)射光均被探測(cè)針孔阻擋。激光共焦顯微鏡照明針孔與探測(cè)針孔對(duì)被照射點(diǎn)或被探測(cè)點(diǎn)來(lái)說(shuō)是共軛的,因此被探測(cè)點(diǎn)即共焦點(diǎn),被探測(cè)點(diǎn)所在的平面即共焦平面。計(jì)算機(jī)以像點(diǎn)的方式將被探測(cè)點(diǎn)顯示在計(jì)算機(jī)屏幕上,為了產(chǎn)生一幅完整的圖像,由光路中的掃描系統(tǒng)在樣品焦平面上掃描,從而產(chǎn)生一幅完整的共焦圖像。只要載物臺(tái)沿著Z軸上下移動(dòng),將樣品新的一個(gè)層面移動(dòng)到共焦平面上,樣品的新層面又成像在顯示器上,隨著Z軸的不斷移動(dòng),激光共焦顯微鏡就可得到樣品不同層面連續(xù)的光切圖像。

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