激光共聚焦顯微鏡的介紹

閱讀：556發(fā)布時間：2022-11-21

　　一、激光掃描共聚焦熒光顯微鏡(laserscanningconfocalmicroscopy,LSCM)是一種利用計算機、激光和圖像處理技術(shù)獲得生物樣品三維數(shù)據(jù)、先進(jìn)的分子細(xì)胞生物學(xué)的分析儀器。主要用于觀察活細(xì)胞結(jié)構(gòu)及特定分子、離子的生物學(xué)變化，定量分析，以及實時定量測定等。

　　二、原理：

　　(1)采用點光源照射標(biāo)本，在焦平面上形成一個輪廓分明的小的光點，該點被照射后發(fā)出的熒光被物鏡收集，并沿原照射光路回送到由雙向色鏡構(gòu)成的分光器。

　　(2)分光器將熒光直接送到探測器。光源和探測器前方都各有一個針孔，分別稱為照明針孔和探測針孔。兩者的幾何尺寸一致，約100-200nm；相對于焦平面上的光點，兩者是共軛的，即光點通過一系列的透鏡，最終可同時聚焦于照明針孔和探測針孔。

　　(3)每一幅焦平面圖像實際上是標(biāo)本的光學(xué)橫切面，這個光學(xué)橫切面總是有一定厚度的，又稱為光學(xué)薄片。由于焦點處的光強遠(yuǎn)大于非焦點處的光強，而且非焦平面光被針孔濾去，因此共聚焦系統(tǒng)的景深近似為零，沿Z軸方向的掃描可以實現(xiàn)光學(xué)斷層掃描，形成待觀察樣品聚焦光斑處二維的光學(xué)切片。

　　(4)激光共聚焦的工作原理簡單表達(dá)就是它采用激光為光源，在傳統(tǒng)熒光顯微鏡成像的基礎(chǔ)上，附加了激光掃描裝置和共軛聚焦裝置，通過計算機控制來進(jìn)行數(shù)字化圖像采集和處理的系統(tǒng)。

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