1．雜交瘤陽(yáng)性克隆的篩選并非所有的雜交瘤細(xì)胞都能分泌針對(duì)目的抗原的特異性McAb，因此，必須通過(guò)可靠、簡(jiǎn)便、快速的方法進(jìn)行篩選和克隆化。具體方法依抗原性質(zhì)及抗體類(lèi)型而定。常用的方法有酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)、放射免疫測(cè)定、直接和間接熒光抗體技術(shù)以及免疫酶斑點(diǎn)試驗(yàn)等。

2．克隆化技術(shù)為確保McAb的純一性及無(wú)關(guān)克隆的過(guò)度生長(zhǎng)，要將陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行單細(xì)胞分離培養(yǎng)，產(chǎn)生單克隆雜交瘤細(xì)胞。經(jīng)反復(fù)2～3次檢測(cè)均為陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞，應(yīng)及早進(jìn)行克隆化培養(yǎng)。常用方法有：有限稀釋法（limiting dilution, LD )、軟瓊脂法、直接挑取法及熒光激活細(xì)胞分離儀（FACS)分離法。以LD法zui為常用，效果好，簡(jiǎn)便。

(1）有限稀釋法：將細(xì)胞重懸，收集計(jì)數(shù)。按105,104,103,102到101的密度用RPMl 1640作系列稀釋?zhuān)▃ui后一次用*培養(yǎng)液）。取一塊96孔板，預(yù)先按每孔105～106/100ul*培養(yǎng)液加好飼養(yǎng)細(xì)胞，然后加入8～10/ml的低密度細(xì)胞懸液，每孔100ul，置5% C02，37℃溫箱培養(yǎng)7～10天，其間盡量少作觀察。之后，選擇單個(gè)克隆生長(zhǎng)的陽(yáng)性孔再一次進(jìn)行克隆。一般需要如此反復(fù)3～5次，直至達(dá)100％陽(yáng)性孔時(shí)即可。

(2）軟瓊脂法：是將細(xì)胞置于瓊脂糖凝膠半固體培養(yǎng)液中增殖的方法。將雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)在軟瓊脂板上，待單個(gè)細(xì)胞形成群落后，再用吸管吸出，反復(fù)吹打以分散細(xì)胞。將吸出的細(xì)胞移入小孔中繼續(xù)培養(yǎng)。用這種方法可以吸出大量克隆進(jìn)行增殖和分析。