Wistar大鼠處死，腫瘤細胞迅速取出胸主動脈，浸泡在含無菌PBS的表面皿中，轉移到無菌超凈臺。在表面皿中漂洗主動脈去除殘留的血跡，縱向剪開主動脈，把主動脈鋪平并使內膜朝上，用鑷子來回刮除內膜層，剝離血管中膜。將剝離的血管中膜用眼科剪剪碎，碎片大小在1 mm×1 mm左右。裝入含0.25%胰酶的玻璃培養(yǎng)瓶中于37℃條件下消化。當在顯微鏡下觀察組織塊表面出現大量細胞時應立即加入血清終止消化，一般消化的時間在 3.5 h。終止消化后將玻璃培養(yǎng)瓶置于37℃空氣搖床振搖10 min，繼續(xù)用吹打的方法使組織塊表面的細胞盡可能脫落。待細胞從組織塊脫離后，120目細胞篩過濾，轉入離心管內離心，棄上清，用含20%小牛血清的 DMEM培養(yǎng)基吹打細胞，zui后接種于25 mL培養(yǎng)瓶，放入CO2孵箱培養(yǎng)，48 h后換液。
細胞融合后，倒去舊的培養(yǎng)液，加入適量的0.25%胰酶，顯微鏡下觀察，見細胞收縮后去除消化液，加入適量培養(yǎng)液，吹打細胞，以1∶2接種于新培養(yǎng)瓶中，補足培養(yǎng)液，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。傳代細胞從第三代開始可換用含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)。VSMC 至少可以傳16代以上，并且從第二代開始平滑肌細胞即可凍存。
相差顯微鏡下，腫瘤細胞未匯合之前多數呈梭形，至匯合后，部分區(qū)域細胞束狀排列，呈典型的“峰和谷”狀態(tài)。將傳代獲得的平滑肌細胞接種于蓋玻片上，3~4天后至亞匯合狀態(tài)，取出細胞爬片，PBS清洗后用4℃純丙酮固定15~30 min，自然晾干。采用小鼠抗大鼠α-肌動蛋白抗體免疫組織化學染色鑒定VSMC肌動蛋白。根據S-P免疫組織化學染色的常規(guī)方法，以平滑肌細胞胞漿棕黃色為陽性結果。
400mg    Mitoxantrone Hydrochloride     70476-82-3     鹽酸米托蒽醌標準品
400mg    Meloxicam     71125-38-7     美洛昔康標準品
400mg    Mafenide Acetate    13009-99-9     醋酸磺胺米隆標準品
400mg    Levocarnitine     541-15-1     左卡尼汀標準品
400mg    Ioxilan    107793-72-6     碘昔蘭標準品
400mg    Iopromide     73334-07-3     碘普羅胺標準品
400mg    Etodolac    41340-25-4    依托度酸標準品
400mg    Cloprostenol Sodium    55028-72-3    氯前列烯醇鈉標準品
400mg    Climbazole    38083-17-9    苯咪丁酮標準品
400mg    Ciprofloxacin Hydrochloride    86393-32-0    鹽酸環(huán)丙沙星標準品
腫瘤細胞