小鼠正常食管上皮細胞；MNEEC/HL-009圖片【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 小鼠正常食管上皮細胞；MNEEC/HL-009圖片
形態(tài)特性  上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件  基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權限 未定

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內出現(xiàn)任何問題，導致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內，吸除或倒掉細胞瓶內舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉移到無菌離心管內，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

GBP5/Guanylate binding protein 5  鳥嘌呤核苷酸結合蛋白5抗體規(guī)格: 0.2ml
RIP2  受體結合絲氨酸蘇氨酸激酶2抗體規(guī)格: 0.2ml
CD31/PECAM-1  血小板內皮細胞黏附分子-1抗體規(guī)格: 0.1ml
BMP9  骨形態(tài)發(fā)生蛋白9抗體規(guī)格: 0.2ml
Phospho-PTEN(Ser385)  磷酸化瘤抑制基因PTEN抗體規(guī)格: 0.1ml
CCR10  細胞表面趨化因子受體10抗體規(guī)格: 0.1ml
MAGEA10  黑色素瘤相關抗原10抗體規(guī)格: 0.2ml
PPIL1  親環(huán)素相關蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml
Caspase-6 (NT)  半胱胺酸蛋白酶蛋白-6抗體(N端)規(guī)格: 0.1ml
PNPLA6/NTE  含patatin樣磷脂酶6抗體規(guī)格: 0.1ml
PI 3 Kinase p85 beta  磷脂酰肌醇激酶p85β抗體規(guī)格: 0.1ml
phospho-B-Raf (Ser446)  磷酸化B-Raf抗體規(guī)格: 0.1ml
Destrin 19/ADF  肌動蛋白解聚因子19抗體規(guī)格: 0.1ml
Phospho-PDGFRA(Tyr1018)  磷酸化血小板源性生因子受體-α抗體規(guī)格: 0.1ml
phospho-SCNN1B(Ser633)   磷酸化上皮鈉通道β2抗體規(guī)格: 0.1ml
FAM129A/Cell growth inhibiting gene 39 protein  細胞生抑制基因39蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
Phospho-p90RSK(Ser380)  磷酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶p90RSK蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml總測試盒 / 總脂酶測試盒    24T    18-0780-24
Denhardt 溶液，50×    100mL    91104A-100
200U        Therminator γ DNA 聚合酶
15 次        非酶 DNA 清除劑 -2
1g        L- 谷胱甘肽 ( 氧化型 )
100 次        植物種屬鑒定 PCR Mix 7
氯化    100g    CAS7447-40-7
增強型 DAB 顯色試劑盒    100mL    81223-100
大提柱式 DNA 清除劑    5次    90802-5
5μg        Oligo dT12-18 引物，0.5μg/μL
50mg        Carboxy-PTIO( 一氧化氮清除劑 )
10mL        一步式廣譜 DNAout
50mL        SP 交換介質
生物素化蛋白 L    0.5mg    131101-0.5
接頭 DNA(Hind Ⅲ -Sma I)    5nmol    130987C-5
200mL        小鼠白細胞分離液 1.093
50 次        即用型多重 PCR 試劑盒
100mg        5- 溴 -4- 氯 -3- 吲哚 -β-D- 半乳糖苷