狗肺成纖維樣細(xì)胞；DogL1說明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 狗肺成纖維樣細(xì)胞；DogL1說明書
形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細(xì)胞系來源于一雄性家狗的肺組織。1990年由中國科學(xué)院昆明細(xì)胞庫建立。 
培養(yǎng)條件  McCoy's 5A Media (Modified with Tricine)  15%NBS
傳代方法  1：2傳代；3-4天一次
傳代情況 P5
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法（-）
STR  -
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

 5,5-二甲基海因    分子式：    128.13    分子量：     C5H8N2O2    英文名稱：    Two 5,5- methyl hydantoin    CAS號：    77-71-4    
 3-羥基-2,4,6-三溴苯甲酸(TBHBA)    分子式：    374.81    分子量：     C7H3Br3O3    英文名稱：    3- hydroxy -2,4,6- three bromo benzoic acid (TBHBA)    CAS號：    14348-40-4    
 異戊基硫醇    分子式：    104.21    分子量：     C5H12S    英文名稱：    Isoamyl mercaptan    CAS號：    541-31-1    
 乙二醇丙    分子式：    104.15    分子量：     C5H12O2    英文名稱：    Ethylene glycol propylene glycol ether    CAS號：    2807-30-9    
緩沖劑                                    
 精噁唑禾草靈    分子式：    333.72    分子量：     C16H12ClNO5    英文名稱：    Fenoxaprop-p-ethyl    CAS號：    113158-40-0    
 乙氧氟草    分子式：    361.7    分子量：     C15H11ClF3NO4    英文名稱：    Ethylene oxide.    CAS號：    42874-03-3    
 醋酸可的松    分子式：    402.47    分子量：     C23H30O6    英文名稱：    Cortisone acetate    CAS號：    1950/4/4    
 新型殺螨劑    分子式：        分子量：        英文名稱：    New type of mite    CAS號：    560121-52-0    
 紫草酸    分子式：    538.46    分子量：    C27H22O12    英文名稱：    Purple oxalic acid    CAS號：    28831-65-4    
 鹽酸小檗堿    分子式：    371.81422    分子量：    C20H18ClNO4    英文名稱：    Berberine hydrochloride    CAS號：    633-65-8支氣管上皮細(xì)胞生長因子    21-0440-5    5mL
2.0 mL RNase-free 離心管    17-003-500    500 支
1mL    Protein A 磁珠    
1mL    BL21-CodonPlus-RIL 種    
1mg    NS-2028(sGC 抑制劑 )    
10mL    DNA 洗脫液 2.0    
Okadaic acid 鹽 (PP1 和 PP2A 抑制劑 )    23-0560-10    10μg
酵母 DNAout    130990-50    50 次
500mg    RNase A 干粉    
100mL    超培養(yǎng)基    
10mL    氯溶液 ,25mg/mL    
1mL    羧芐青溶液 ,50mg/mL    
海腎熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒    130598-100    100 次
TE 緩沖液，PH8.0    80934C-10    10mL
10 次    Southern 細(xì) (G-)DNAout    
0.5mL    dITP 溶液，100mM    
1 mL    即用型 PCR 試劑盒 2.0     
1mL    C43(DE3) 種    
克必隆 eTS PCR 法 cDNA 合成試劑盒    130404-10    10 次