兔角膜前基質(zhì)層成纖維細(xì)胞；RCFBF說明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 兔角膜前基質(zhì)層成纖維細(xì)胞；RCFBF說明書
形態(tài)特性  成纖維樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  北京眼科研究所建系細(xì)胞。 
培養(yǎng)條件  F12: Ham's F12 Nutrient Mixture  5%FBS
傳代方法  1:3傳代；2~3天1次。
傳代情況 P8
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法（-）
STR  -
同工酶 
染色體  
使用權(quán)限 A類

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

 酸性湖藍(lán)V    分子式：    566.66    分子量：     C27H31N2NaO6S2    英文名稱：    Alphaurine V    CAS號：    129-17-9    
 甲基藍(lán)    分子式：    799.8    分子量：     C37H27N3Na2O9S3    英文名稱：    Methyl blue    CAS號：    28983-56-4-    
 二氯二茂鋯    分子式：    292.32    分子量：     C10H10Cl2Zr    英文名稱：    Two CL two    CAS號：    1291-32-3    
 1-萘甲基胺    分子式：    157.22    分子量：     C11H11N    英文名稱：    1- naphthalene    CAS號：    118-31-0    
 5-硝基-6-氯代甲苯-3-磺酸鈉鹽    分子式：        分子量：        英文名稱：    5- nitro -6- -3- sulfonic acid sodium salt    CAS號：        
 煌橙    分子式：    350.32    分子量：     C16H11N2NaO4S    英文名稱：    Brilliant orange    CAS號：    1934-20-9    
 1,5-萘二磺酸鈉    分子式：    332.25334    分子量：     C10H6Na2O6S2    英文名稱：    1,5- naphthalene two sulfonic acid    CAS號：    1655-29-4    
 4-氟-7-硝并-2-氧雜-1,3-二唑(NBD-F)    分子式：    183.1    分子量：     C6H2FN3O3    英文名稱：    4- -7- -1,3- and -2- two (NBD-F)    CAS號：    29270-56-2    
 1,3-二氯-2-丙醇    分子式：    128.98    分子量：     C3H6Cl2O    英文名稱：    1,3- two -2-    CAS號：    96-23-1    
 二乙二醇二乙    分子式：    162.23    分子量：     C8H18O3    英文名稱：    Diethylene glycol ether two    CAS號：    112-36-7    
 芴    分子式：    166.22    分子量：     C13H10    英文名稱：    Fluorene    CAS號：    86-73-7 50 次    柱式凋亡 DNAout    
1mL    HB101 種    
Therminator γ DNA 聚合酶    130617-200    200U
電泳二甲苯藍(lán) FF 溶液，1%    100934-10    10mL
1000U    T4 RNA 連接酶    
25mg    蛋白酶 K    
100mL    增強型 DAB 顯色試劑盒    
100μL    小鼠抗 MBP 標(biāo)簽單抗    
Xa 因子蛋白酶    120507-50    50μg
dTTP 溶液，2.5mM    130913-2    2mL
0.83nmol    通用 miRNA 克隆接頭    
50mL    二甲基亞砜 ( 細(xì)胞培養(yǎng) )    
30 次    一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒    
20 次    DNA 去磷酸化試劑盒    
瓊脂粉    CAS9002-18-0    100g
轉(zhuǎn) ESPES 基因植物 PCR Mix    131129L-100    100 次
50 次    細(xì)胞核蛋白提取試劑盒    
250g    干粉型 SOC 培養(yǎng)基    
1g    二磷酸苷二    
10 次    柱式醬油 DNAout    
L- 胱氨酸    CAS56-89-3    25g