荷斯坦奶牛胎兒成纖維細胞；Human Cell line 1D3說明書【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 荷斯坦奶牛胎兒成纖維細胞；Human Cell line 1D3說明書
形態(tài)特性  成纖維細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C4
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 未定

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

Dami(人巨核細胞白血病細胞)    5×106cells/瓶×2            
小鼠膚成纖維樣細胞    英文名稱：        MouseS    
Acc-2(人涎腺腺樣囊性細胞)    5×106cells/瓶×2            
透明質(zhì)酸酶(含10mL酶解緩沖液)    1mL            
3.5% NaC1葡萄糖磷酸鹽胨水發(fā)酵管    BR    國產(chǎn)/進口    20支    
人腎細胞    英文名稱：        Ketr-3    
O157顯色培養(yǎng)基配套平皿/大腸桿菌O157顯色培養(yǎng)基配套平皿/O157 Chromogenic Medium Dish        國產(chǎn)/進口    9㎝/塊    
人間充質(zhì)干細胞-臍帶                
副溶血性弧菌增菌液    副溶血性弧菌的增菌培養(yǎng)    國產(chǎn)/進口    250克    
猴胚胎腎上細胞    英文名稱：        Marc145    
馬鈴薯葡萄糖瓊脂/PDA瓊脂/Potato Dextrose Agar    霉菌分離培養(yǎng)和霉菌酵母菌計數(shù)    國產(chǎn)/進口    250克    
NCI-H2227(人小細胞肺細胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
人支氣管上細胞    英文名稱：        BEAS-2B    
豬膽鹽/Bile salt from pig    BR，65%    國產(chǎn)/進口    25/1000克    
肺腺    英文名稱：        GLC-82    
米勒-海頓肉湯/MH肉湯/酪蛋白肉湯/水解酪蛋白肉湯/MHB    用于抗菌素藥物敏感性試驗    國產(chǎn)/進口    250克    
大鼠骨髓基質(zhì)細胞*培養(yǎng)基    100mL            
無菌雞血清/Sterile Defidrinated Chicken Blood    BR    國產(chǎn)/進口    100/400毫升    
SW 982(人滑膜肉瘤細胞)    5×106cells/瓶×2 100U    膽固醇酯酶    
100 T    GSH—ST 測試盒    
丁酰膽堿酯酶    CAS9001-08-5    500U
驢抗山羊 IgG，堿性磷酸酶標記    131148-60    60μL
柱式血液 RNAout    71202-50    50 次
10g    N ,N- 雙 (2- 羥乙基 ) 甘氨酸    
250 mL    4% 多聚甲醛 (RNA )    
5mL    平滑肌細胞生長因子    
5次    ECL 法地高雜交檢測試劑盒    
前脂肪細胞生長因子    21-0280-5     5mL
RNase-free Tris HCl,1M,pH 8.5    80918-100    100mL
100U    Pfu DNA 聚合酶    
500 次    BCA 法蛋白定量試劑盒    
20mg    L-Canavanine(iNOS 抑制劑 )    
30mL    天凈沙核酸濃縮劑    
L-Glutathione (reduced form)( 抗氧化劑 )    23-0400-1    1g
柱式植物 DNAout    60602-50    50 次
10mL    RNA  DEPC ( 焦碳酸二乙酯 )    
2 μg    Cre/Lox 系統(tǒng)載體系列    
5mL    dNTP 溶液，100mM     
1個    4mL DNA 離心超濾管 (9-15 KD)    
熒光法死細胞檢測試劑盒    140633-1000    1000 次
氨基磁珠    130515-2    2mL