產(chǎn)品屬性：

組織來(lái)：前列腺

生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

背景描述：RWPE-2細(xì)胞是由Webber·M·M于1996年建株

生物安全等級(jí)：2 [Cells contain Human Papilloma viral (HPV) sequences]

生長(zhǎng)培養(yǎng)基：K-SFM＋0.05mg/mL BPE＋5ng/mL EGF＋1% P/S

推薦傳代比例：1：3-1：4

推薦換液頻率：2~3次/周

凍存條件：

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40S+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件：

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

致瘤性：Yes, in nude mice. Yes, in soft agar.

受體表達(dá)情況：androgen receptor, expressed (upregulated upon exposure to androgen)

抗原表達(dá)情況：kallikrein 3, KLK3 (prostate specific antigen, PSA); Homo sapiens, expressed (upon exposure to androgen)

基因表達(dá)情況：cytokeratin 18, cytokeratin 8

保藏機(jī)構(gòu)：ATCC; CRL-11610

冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃，30~60分鐘→ （-20℃，30分鐘） → -80℃，16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。-20℃不可超過(guò)1小時(shí)，以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入 10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4min 1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

產(chǎn)品僅用于科研：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4mL酶消化液（0.1%胰和0.1%I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)。

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

RNA 級(jí) CTAB ( 十六烷基基化銨 )100g  脂蛋白純化試劑盒50次

RNA 級(jí) DEPC ( 焦碳酸 )10mL  脂蛋白 PAGE 染液1套

RNA 級(jí) DTT ( 二硫代蘇糖醇 )10g  支氣管上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子5mL

RNA 級(jí) EDTA·2Na ( 四乙酸二 )100g  支氣道上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子5mL

RNA 級(jí) Guanidium HCl ( 鹽酸胍 )100g  真細(xì)菌種屬鑒定 PCR Mix 2100次

FITC標(biāo)記的腺苷酸環(huán)化酶5抗體

FITC標(biāo)記的腺苷酸環(huán)化酶4抗體

FITC標(biāo)記的腺苷酸環(huán)化酶3抗體

FITC標(biāo)記的腺苷酸環(huán)化酶10抗體

FITC標(biāo)記的芳香胺N-乙?；D(zhuǎn)移酶抗體

RWPE-2 (前列腺正常細(xì)胞)大鼠低密度脂蛋白受體(LDLR)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5(LRP5)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白8(LRP8)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)elisa分析檢測(cè)試劑盒

大鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF1α)elisa檢測(cè)試劑盒