蛋白表達(dá)及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動(dòng)物細(xì)胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，通過(guò)瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過(guò)親和，離子交換，疏水及凝膠過(guò)濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。

4.通過(guò)SDS-PAGE電泳檢測(cè)每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過(guò)Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性。

交付內(nèi)容：純化好的目標(biāo)蛋白及純化報(bào)告?？砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶?biāo)簽（Tag）或切除純化標(biāo)簽（Tag）的最終蛋白，純度最高可達(dá)90%以上。

產(chǎn)品屬性：

英文名稱：Recombinant Glycogen Phosphorylase, Muscle (PYGM)

GPMM; Phosphorylase,Glycogen; McArdle Syndrome,Glycogen Storage Disease Type V; Myophosphorylase

型號(hào)：GOY-01D343

酶與激酶

代謝通路

內(nèi)分泌學(xué)

物種：Homo sapiens (Human，人)

來(lái)源：原核表達(dá)

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)

亞細(xì)胞定位：：細(xì)胞質(zhì)

預(yù)測(cè)分子量：21.7kDa

實(shí)際分子量：26kDa(差異分析請(qǐng)參閱說(shuō)明書(shū))

片段與標(biāo)簽：Arg11~Gly187 with N-terminal His Tag

緩沖液成份：20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液（pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300）

性狀：凍干粉

純度：> 97%

等電點(diǎn)：5.6

應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg

以下是相關(guān)產(chǎn)品：

英文名稱：Recombinant NADH Dehydrogenase 1 (ND1)  產(chǎn)品名稱：NADH脫氫酶1(ND1)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Phosphodiesterase 5A, cGMP Specific (PDE5A)  產(chǎn)品名稱：磷酸二酯酶5A(PDE5A)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Matrix Metalloproteinase 23A (MMP23A)  產(chǎn)品名稱：基質(zhì)金屬23A(MMP23A)重組蛋白物種：Rattus norvegicus (Rat，大鼠)

英文名稱：Recombinant Transglutaminase 6 (TGM6)  產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)酶6(TGM6)重組蛋白物種：Mus musculus (Mouse，小鼠)

英文名稱：Recombinant Pancreatic Lipase (PL)  產(chǎn)品名稱：胰脂肪酶(PL)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Protein Kinase, cGMP Dependent Type II (PRKG2)  產(chǎn)品名稱：cGMP依賴性蛋白激酶Ⅱ(PRKG2)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

操作步驟：

Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺(tái)上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

公司正在出售的產(chǎn)品：

半胱胺酸蛋白-6抗體（C端） Caspase-6 (CT)

鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體 Calponin 1

周期素A2抗體 Cyclin A2

鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體 CaMK2 alpha

鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2b/2γ抗體 CaMK2 beta gamma delta

細(xì)胞凋亡敏感性基因抗體 Exportin-2

天冬-特異性家族抗體 Caspase-1 P10

半胱胺酸-10抗體 Caspase-10

半胱胺酸蛋白-13抗體 Caspase-13 + 4

CD10抗體 CD10

半胱胺酸蛋白-12抗體 Caspase-12

CD105抗體 CD105

糖原磷酸化酶M(PYGM)重組蛋白人人氣管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基紫紅曲霉 Monascus purpureus

百脈根根瘤菌 Rhizobium loti酸球菌脂亞種 Lactococcus lactis subsp. cremoris

植物桿菌 Lactobacillus plantarum酒假絲酵母 Candida kefyr

Ampicillin(100mg/ml,1000X)鬼傘屬 Bradyrhizobium vigna

桿菌 Lactobacillus sp.三葉草根瘤菌 Rhizobium trifolii

 正常細(xì)胞一步法Western專用封閉液

豹皮香菇 Lentinus lepideusP19(小鼠畸胎瘤細(xì)胞)

負(fù)鼠腎細(xì)胞香菇 Lentinula edodes

猴菌釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

小鼠神經(jīng)干細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）凍膠假絲酵母 Candida gelida

人十二指腸腺細(xì)胞苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti

粗狀假絲酵母 Candida valida不動(dòng)桿菌 Acinetobacter sp.

臘狀芽胞桿菌 Bacillus cereusSaos-2(人骨肉瘤細(xì)胞)