蛋白表達(dá)及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動(dòng)物細(xì)胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，通過(guò)瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過(guò)親和，離子交換，疏水及凝膠過(guò)濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。

4.通過(guò)SDS-PAGE電泳檢測(cè)每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過(guò)Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性。
公司產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床！

商品介紹：

相關(guān)產(chǎn)品：

支鏈α-酮酸脫氫酶(BCKDK)重組蛋白英文名稱：Recombinant Branched Chain Alpha-Ketoacid Dehydrogenase Kinase (BCKDK)Rattus norvegicus (Rat，大鼠)

支鏈轉(zhuǎn)氨酶1(BCAT1)重組蛋白英文名稱：Recombinant Branched Chain Aminotransferase 1, Cytosolic (BCAT1)Homo sapiens (Human，人)

支鏈轉(zhuǎn)氨酶2(BCAT2)重組蛋白英文名稱：Recombinant Branched Chain Aminotransferase 2, Mitochondrial (BCAT2)Homo sapiens (Human，人)

脂蛋白關(guān)聯(lián)磷脂酶A2(LpPLA2)活性蛋白英文名稱：Active Phospholipase A2 Group VII (LpPLA2)Homo sapiens (Human，人)   

操作步驟：

Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺(tái)上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

注意事項(xiàng)：

1、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時(shí)間有所不同，應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來(lái)調(diào)整固定時(shí)間。

2、雖然作用溫和，但能硬化組織，固定時(shí)間過(guò)久會(huì)導(dǎo)致組織變脆，切片時(shí)易碎。因此固定時(shí)間通常不宜超過(guò) 24 小時(shí)。

3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結(jié)果。因此，4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí)，有時(shí)需要對(duì)抗原先進(jìn)行修復(fù)，然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。

4、本產(chǎn)品對(duì)人體有害，操作時(shí)請(qǐng)小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

5、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作 
PSG6產(chǎn)品名稱: 特異性糖蛋白6抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, GuineaPig

GOLPH3產(chǎn)品名稱: 高爾基體磷蛋白3抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Cow, Horse

GCNT1產(chǎn)品名稱: GCNT1葡萄糖轉(zhuǎn)移mei抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Cow, Sheep

Vibrio Parahemolyticus Polar flagellin B/D產(chǎn)品名稱: 副溶性弧菌菌體鞭毛蛋白抗體標(biāo)記: Unconjugated

ADAM10產(chǎn)品名稱: 去整合su樣金屬蛋白mei10（CD156c）抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit

FMDV VP1產(chǎn)品名稱: 口蹄疫毒A1型VP1抗體標(biāo)記: Unconjugated

RRAS產(chǎn)品名稱: 原基因R-Ras抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Sheep

FOXN4產(chǎn)品名稱: FOXN4蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Rabbit, Sheep

DOCK5產(chǎn)品名稱: 細(xì)胞質(zhì)分裂付出蛋白5抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Rabbit

phospho-Alpha synuclein (Tyr133)產(chǎn)品名稱: 核突觸蛋白α抗體產(chǎn)品別名: α Synuclein; α-Synuclein.   

單磷酸腺苷脫氨酶3(AMPD3)重組蛋白人NADH脫氫mei3(ND3)ELISA試劑盒ND3NADH脫氫mei3elisamei聯(lián)免疫試劑盒Human NADH Dehydrogenase 3(ND3)ELISA Kit

人NADH脫氫mei2(ND2)ELISA試劑盒ND2NADH脫氫mei2elisa檢測(cè)試劑盒Human NADH Dehydrogenase 2(ND2)ELISA Kit

人M-期磷蛋白9(MPHOSPH9)ELISA試劑盒MPHOSPH9M-期磷蛋白9elisa kitHuman M-Phase Phosphoprotein 9(MPHOSPH9)ELISA Kit

人M-期磷蛋白8(MPHOSPH8)ELISA試劑盒MPHOSPH8M-期磷蛋白8ELISA試劑盒Human M-Phase Phosphoprotein 8(MPHOSPH8)ELISA Kit

人M-期磷蛋白6(MPHOSPH6)ELISA試劑盒MPHOSPH6M-期磷蛋白6elisamei聯(lián)免疫試劑盒Human M-Phase Phosphoprotein 6(MPHOSPH6)ELISA Kit