PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

【產(chǎn)品名稱】四輻射鳥圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
【英文名稱】Ornithostrongylus quadriradiatus
【產(chǎn)品編號(hào)】YSP7029
【包裝規(guī)格】50T
【預(yù)期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測(cè)，所用儀器為實(shí)時(shí)熒光PCR儀，可通過實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，針對(duì)鴨源性成分核酸序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針，通過實(shí)時(shí)熒光一步法RT-PCR（Taqman探針法）對(duì)鴨源性成分核酸進(jìn)行定性檢測(cè)。
*的擴(kuò)增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應(yīng)體系保證更高的擴(kuò)增效率。以相同量的293T細(xì)胞cDNA為模板，擴(kuò)增β-actin基因，與同類產(chǎn)品相比，UNICONTM qPCR Master Mix擴(kuò)增信號(hào)更強(qiáng)，擴(kuò)增效率更高。
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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
四輻射鳥圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
實(shí)驗(yàn)步驟：
典型的PCR由
（1）高溫變性模板；
（2）引物與模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
97%1g1g竹節(jié)參皂苷V6976370thyroid hormone receptor interactor 6

 趨化因子C-C-基元受體2(CCR2)重組蛋白英文名稱：Recombinant Chemokine C-C-Motif Receptor 2 (CCR2)

維生素D受體(VDR)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)重組人 STX3 / Syntaxin 3 蛋白 (His 標(biāo)簽)*250(g)

人白介素4(IL4)FBXL21/FBL3B  FBXL21蛋白抗體規(guī)格:96T/48TAndrographolide規(guī)格:20mgKlotho蛋白檢測(cè)試盒20mg人結(jié)腸直腸腺癌細(xì)胞，NCIH508細(xì)胞1x10^6cells

99%10g5g白花前胡香豆精I(xiàn)II64431965Thyroglobulin

去甲烏藥堿鹽鹽 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR Higenamine hydrochloride

心肌肌鈣蛋白I(TNNI3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)重組人 MAPRE3 / EB3 蛋白 (His 標(biāo)簽)*250(g)

人白介素3(IL3)FNDC2/5  Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白2/5抗體規(guī)格:96T/48TPowdered Andrographis Extract規(guī)格:125mgKlotho蛋白檢測(cè)試盒20mg人結(jié)直腸癌尿嘧啶耐藥株，HCT8/FU細(xì)胞1x10^6cells

二羅丹明1235mg

3,29-二甲?；闃侨嗜?訂購|咨詢 規(guī)格： 10mg 大腸癌腫瘤突變蛋白抗體  

轉(zhuǎn)錄子維相關(guān)孤兒受體檢測(cè)試盒20mg補(bǔ)體成分5檢測(cè)試盒Complement3

D熒光素鹽5mg

蛻皮激素;β-蛻皮激素；β-蛻皮甾  英文名稱：The molting hormone ecdysone; beta; beta ecdysterone   保存：-20℃   規(guī)格：HPLC≥98% 20mg/支 Toll樣受體6抗體

Casein HydrolysateBR膜攻擊復(fù)合物檢測(cè)試盒20mg補(bǔ)體蛋白3檢測(cè)試盒Complement4

100g25ml過化酶(CAT)檢測(cè)試劑盒(鉬銨比色法)Cysteine leukotriene receptor 1

地奧司明; 香葉木苷; 布枯苷; 3', 訂購|咨詢 規(guī)格： HPLC≥98%,20mg/支 載脂蛋白A2抗體 AQP-1 ELISA Kit 水通道蛋白1(AQP-1)ELISA試劑盒

脂肪細(xì)胞膜關(guān)聯(lián)蛋白檢測(cè)試盒20mg補(bǔ)體蛋白4檢測(cè)試盒Complementfragment3a
四輻射鳥圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒7O白楊素 CAS號(hào)：  規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

巨大戟 CAS號(hào)： 30220463 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

25氧原人參三 CAS號(hào)：  規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

3O沒食子 CAS號(hào)： 3934847 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

57氧異黃 CAS號(hào)： 82517122 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

5糠醛 CAS號(hào)： 620020 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

金松雙黃 CAS號(hào)： 521346 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

角鯊 CAS號(hào)： 7683649 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

氧醉椒素 CAS號(hào)： 500620 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢

異茜草素1 CAS號(hào)： 7460437 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢

肌 CAS號(hào)： 87898 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

酒石伐侖克林 CAS號(hào)： 375815875 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

黃連堿 CAS號(hào)：  規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

劍麻皂苷元 CAS號(hào)： 77601 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

2金剛 CAS號(hào)： 700583 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢