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支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒（不含Taq酶）

10種常見支原體檢測限

支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒（經(jīng)典法）（不含Taq酶）操作步驟

第1步：樣本處理

a. 細(xì)胞培養(yǎng)上清

b. 生物藥或需遵循藥典的樣本

說明：①樣品基質(zhì)可能會影響檢測的靈敏度。收集和篩選更高的樣品量可提高測定靈敏度。

  ②細(xì)胞培養(yǎng)物樣本含豐富的DNA酶，在低溫下也能降解支原DNA，影響檢測靈敏度。

建議：樣本做DNA抽提處理，實現(xiàn)高靈敏度。

推薦：德國MB公司生產(chǎn)的支原體DNA提取試劑盒，Venor® Gem Sample Preparation Kit。該DNA抽提試        劑盒已經(jīng)過廣泛驗證。

第2步：試劑制備

第3步：PCR體系建立

a. 細(xì)胞培養(yǎng)上清

b. 生物藥或需遵循藥典的樣本

第4步：啟動PCR反應(yīng)

第5步：電泳結(jié)果分析

191bp為內(nèi)控對照條帶，表明PCR反應(yīng)正常。

當(dāng)樣本存在支原體污染時，由于內(nèi)控對照與支原體DNA存在競爭，內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ɡ缰гwDNA＞103拷貝）。

陽性對照中支原體DNA＞104拷貝，內(nèi)控對照條帶會*消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結(jié)果。

如果待測樣本對PCR產(chǎn)生抑制，則內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ê完幮詫φ障啾龋?，此時應(yīng)先進(jìn)行DNA抽提（推薦使用：Venor® Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒，然后再檢測。