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   第二抗體是指能和抗體結(jié)合，即抗體的抗體，其主要作用是檢測抗體的存在，放大一抗的信號。二抗是利用抗體是大分子的蛋白質(zhì)具有抗原性的性質(zhì)，去免疫異種動物，由異種動物的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的針對于此抗體的免疫球蛋白。二抗針對某一特定物種（如小鼠）的所有抗體（如IgG、IgM或IgA等）均具有反應(yīng)性。

二抗與一抗的區(qū)別？  

   *抗體就是平常所說的抗體，即能和抗原特異性結(jié)合。第二抗體是能和抗體結(jié)合的，即抗體的抗體。主要用于檢測抗體的存在。一抗是針對抗原的抗體，二抗是針對一抗的抗體。即抗體也可以充當(dāng)抗原刺激機體產(chǎn)生抗體。也就是說，抗原進入機體刺激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應(yīng)答，由B細胞可以產(chǎn)生與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的特殊蛋白質(zhì)。一抗二抗都是一種可以特異結(jié)合別的物質(zhì)的基團，而且一抗可以至少結(jié)合兩種其他基團（底物和二抗）。

為什么標(biāo)記二抗檢測以及二抗的作用？

    一抗可以特異結(jié)合底物，就是識別出我們想要檢測的東西。一抗和底物結(jié)合與否用肉眼是看不出來的。二抗可以和一抗結(jié)合，并帶有可以被檢測出的標(biāo)記(如帶熒光、放射性、化學(xué)發(fā)光或顯色基團），作用是檢測一抗。如果一抗自己帶有可以被檢測出的標(biāo)記(如帶熒光、放射性、化學(xué)發(fā)光或顯色基團），則不需要二抗。但這樣成本很高，因為一種一抗只識別一種底物，這樣成本高，工作量大。所以如今的設(shè)計一般是二抗帶上可檢測標(biāo)記，再來檢測一抗，而一抗識別底物。這樣，當(dāng)一抗結(jié)合到底物上，就可以通過二抗檢測出來。

二抗的設(shè)計原理

   根據(jù)同一種來源的同種亞型抗體的Fc段是保守的，根據(jù)這一原理設(shè)計出二抗，二抗與一抗的來源Fc段亞型相關(guān)。

如何選擇正確的二抗？

   1.針對一抗的宿主來源選擇：二抗指向一抗的物種

   2.針對一抗的類別亞型的選擇： 二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白，因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體。

   3.二抗的種屬來源：除雙標(biāo)實驗以外，一般來說，不同的種屬來源與二抗的質(zhì)量沒有必然的，來源于山羊的二抗與來源于驢的二抗在一般的實驗里沒有太多的差別。

   4.二抗的耦聯(lián)標(biāo)記：針對不同的實驗方法選擇不同的標(biāo)記，一般來講，耦聯(lián)到二抗上的探針主要有酶(辣根過氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP)，熒光基團(FITC、 Rhodamine、Texas Red、PE、Rhodamine、Dylight等)、生物素、金顆粒。一般做WB、 ELISA、 IHC等實驗都是推薦HRP標(biāo)記的二抗，做IF FC等都是FITC標(biāo)記的抗體。

   5.預(yù)吸附二抗的選擇：對于于富含免疫球蛋白的組織和細胞，通常推薦使用預(yù)吸附血清的二抗于蛋白質(zhì)印跡應(yīng)用。預(yù)吸附的二抗與內(nèi)源免疫球蛋白發(fā)生相互作用的可能性較低，因此可降低非特異性背景

   6.特殊要求： F(ab’)2片段形式的二抗可避免與Protein A /G或與Fc受體的結(jié)合，其分子本身比較小，更容易滲透入細胞組織結(jié)構(gòu)內(nèi)而靈敏度更高 。Fab片段形式的二抗是只含有一個結(jié)合位點，可用來封閉內(nèi)源性的免疫球蛋白；一般無要求的都是指抗IgG H&L，它是zui常用也是的二抗形式，這類抗體和IgG分子的重鏈和輕鏈都可以反應(yīng)，也可以和其他的免疫球蛋白家族（IgM，IgA，IgD,IgE）和亞家族反應(yīng)，因為所有的免疫球蛋白都有相同的輕鏈.