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牛血清白蛋白在免疫檢測過程中起到什么作用

閱讀:4878      發(fā)布時間:2019-5-28
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       在免疫檢測過程中,需要將抗體固定在固相表面,如微孔板,磁顆粒、聚苯乙烯微球或硝酸纖維膜表面。由于蛋白是一種粘性較大的分子,檢測過程中,樣本中的雜蛋白會與固相表面的疏水位點發(fā)生非特異性結合,造成背景干擾。因此,需要將固相表面的多余位點用封閉劑將其封閉,常用的封閉劑,如BSA、酪蛋白、明膠等能夠吸附在固相表面,防止抗體、或者抗原與固相表面發(fā)生非特異性結合,降低檢測本底,提高靈敏度。
  牛血清白蛋白是一種球蛋白,分子量約為66.5kDa,表面含有大量的氨基和羧基殘基,并且BSA的空間結構能夠隨著溫度、pH、鹽濃度發(fā)生變化,是一種柔性分子。作為常見的封閉蛋白,BSA能夠與親水表面、疏水表面,以及活化的共價結合表面,如活化羧基、氨基、環(huán)氧基、甲苯磺?;冉Y合,抑制非特異性吸附,是一種理想的固相封閉劑。
  牛血清白蛋白表面含有大量的羧基、氨基,能夠用于表面的活化基團結合,封閉多余位點,為常見的是化學發(fā)光免疫磁珠偶聯抗體當中的應用。如用EDC活化羧基表面磁珠后,能夠和抗體表面氨基反應,使抗體共價結合在磁珠表面。這一過程需要對多余的活化羧基位點進行封閉,BSA分子尺寸更小,能夠進入到表面抗體間的間隙,并且由于表面含有大量的氨基,與活化羧基反應,封閉多余的活性位點。同時,BSA表面含有大量的羧基,還能夠改善磁珠的親水性。另外,BSA表面含有一定的氨基酸疏水殘基,如丙氨酸、亮氨酸等,也能夠對表面的疏水位點進行封閉。

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