報(bào)告基因是一類使表達(dá)產(chǎn)物易于被檢測的基因，其作用原理是將報(bào)告基因的編碼序列及其表達(dá)調(diào)控序列與目的基因融合形成嵌合基因，在調(diào)控序列的作用下進(jìn)行表達(dá)，通過對報(bào)告基因表達(dá)產(chǎn)物的檢測來評價(jià)目的基因的表達(dá)狀況。
常見的報(bào)告基因包括螢光素酶（Luciferase）、氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶（CAT）、β-半乳糖苷酶（β-gal）、分泌性人胎盤堿性磷酸酶（SEAP）和綠色熒光蛋白（GFP）等。
螢光素酶（Luciferase）是一類在生物體內(nèi)能夠催化熒光素或脂肪醛氧化發(fā)光的酶，從自然界能夠發(fā)光的生物體內(nèi)分離獲得。由于特異性強(qiáng)、靈敏度高、內(nèi)源性低、檢測不受細(xì)胞內(nèi)其他物質(zhì)的影響等優(yōu)點(diǎn)，螢光素酶被作為報(bào)告基因（標(biāo)記蛋白）而被廣泛應(yīng)用。
雙螢光素酶報(bào)告基因檢測系統(tǒng)在單螢光素酶報(bào)告基因的基礎(chǔ)上引入了“內(nèi)參對照"報(bào)告基因，這樣可以減小細(xì)胞數(shù)目、細(xì)胞生長狀態(tài)和轉(zhuǎn)染效率等外在因素對于實(shí)驗(yàn)的影響，使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果更為可信。
本期小愛給大伙帶來一款愛必信爆款雙螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒：雙螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒（abs60341）。
表1 雙螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒（abs60341）
組分 | 名稱 | 100T | 1000T |
A | 5× Passive Luciferase Lysis Buffer | 10ml | 100ml |
B | Firefly Luciferase Assay Buffer | 10ml | 100ml |
C | D-Luciferin | 2mg | 20mg |
D | Renilla Luciferase Assay Buffer | 10ml | 100ml |
E | 50×Coelenterazine | 200ul | 2×1ml |
一、產(chǎn)品特點(diǎn)
二、產(chǎn)品介紹
本試劑盒先以螢光素（Luciferin）為底物來檢測螢火蟲螢光素酶的活性，然后加入抑制螢火蟲螢光素酶催化的物質(zhì)，同時(shí)加入腔腸素（Coelenterazine）檢測海腎螢光素酶的活性，實(shí)現(xiàn)雙螢光素酶報(bào)告基因檢測。適用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)、需要共報(bào)告基因建立內(nèi)參或?qū)崿F(xiàn)多重信號、需要報(bào)告基因減弱的情況如研究負(fù)調(diào)控對刺激產(chǎn)生的細(xì)胞反應(yīng)、實(shí)現(xiàn)較高檢測精度等情況。
圖1 雙螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)流程
三、應(yīng)用
雙螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒是一款應(yīng)用廣泛的科研工具，舉例跟大家詳細(xì)介紹下常見的螢光素酶報(bào)告基因的應(yīng)用。
應(yīng)用1：順式作用原件研究
雞骨形態(tài)生成蛋白15（bone morphogenetic protein 15, BMP15）基因不同啟動子截短體報(bào)告載體的雙螢光報(bào)告結(jié)果顯示，BMP15基因啟動子-153-1 bp 為核心區(qū)域。
應(yīng)用2：細(xì)胞信號通路研究
圖3 檢測不同濃度的HLY78系列衍生物對Wnt信號通路報(bào)告基因TOPflash的螢光素酶活性影響
通過檢測不同濃度的HLY78系列衍生物對Wnt信號通路報(bào)告基因TOPflash的螢光素酶活性影響，篩選出HLY78和HLY119對Wnt信號通路有抑制作用。
應(yīng)用3：反式作用因子研究
圖4 在-562- -200位點(diǎn)是Runx1 發(fā)揮對Mrgprd 基因的轉(zhuǎn)錄激活的關(guān)鍵位點(diǎn)
圖5 Runx1 通過+70 ～ +143位點(diǎn)序列促進(jìn)Mrgprd基因轉(zhuǎn)錄
Runx1（轉(zhuǎn)錄因子）對Mrgprd基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制可能有多種，并非只是通過結(jié)合在Mrgprd基因上游的結(jié)合位點(diǎn)來直接調(diào)控其轉(zhuǎn)錄。
應(yīng)用4：miRNA靶點(diǎn)研究
圖6 miRNA靶點(diǎn)研究案例
miR-1269b過表達(dá)可明顯降低293T細(xì)胞中METTL3-WT的螢光素酶活性，但對METTL3-MUT的活性沒有顯著影響，表明miR-1269b可靶向METTL3 3’UTR，負(fù)調(diào)控GC細(xì)胞中METTL3的表達(dá)。
注：應(yīng)用數(shù)據(jù)均來自文獻(xiàn)
四、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
圖7 Abisn雙螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒與市面上同類產(chǎn)品對比結(jié)果
使用愛必信雙螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒（abs60341）與市面上的同類產(chǎn)品進(jìn)行對比實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)螢火蟲螢光素酶與海腎螢光素酶比值與國外同類產(chǎn)品最為接近。
最后，跟大家透漏個(gè)好消息：雙螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒（abs60341）本月3折優(yōu)惠?。。?/strong>
本期搭檔產(chǎn)品小愛推薦：
? 高效轉(zhuǎn)染 ? 低毒性 ? 操作簡單
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
abs60322 | Lipofect5000 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑 | 0.5ml/1.0ml |
abs60327 | SP懸浮細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑 | 0.5ml/1.0ml/1.5ml |
abs60255 | 質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑盒（貼壁細(xì)胞） | 0.5ml/1.0ml/1.5ml |
abs60256 | PM原代細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑盒 | 0.5ml/1.0ml/1.5ml |
abs60369 | RF 293細(xì)胞DNA轉(zhuǎn)染試劑盒 | 0.5ml/1.5ml |
abs60257 | 溶液A（轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑，僅用于質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染） | 0.25ml/0.5ml/1ml |
參考文獻(xiàn)
[1] 趙海衛(wèi), 韓佩君, 呂欣, 等. 螢光素酶報(bào)告基因在病毒學(xué)研究中的應(yīng)用[J]. 生物技術(shù)通訊, 2015, 26(1): 131-134.
[2] Nature chemical biology vol. 9,9 (2013): 579-85. doi:10.1038/nchembio.1309.
[3] 高廣亮, 李輝, 王啟貴. 雞肝臟基礎(chǔ)型脂肪酸結(jié)合蛋白基因啟動子活性分析[C]// 中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家禽學(xué)分會代表會議暨全國家禽學(xué)術(shù)討論會. 2013.
[4] Kang, Jian , et al. "MicroRNA-1269b inhibits gastric cancer development through regulating methyltransferase-like 3 (METTL3)." Bioengineered 12.1(2021):1150-1160.
[5] 劉子敬, 曹誠. 轉(zhuǎn)錄因子Runx1對Mrgprd基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的分子機(jī)制研究[J]. 華南國防醫(yī)學(xué)雜志, 2020, 34(9):5.
Absin特色產(chǎn)品線：
WB相關(guān)：ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠；IHC相關(guān)：二抗試劑盒、組化筆；IP/CoIP試劑盒；激動劑/抑制劑；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡試劑盒；呼吸爆發(fā)試劑盒；ELISA試劑盒；重組蛋白；抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體、對照抗體；定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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