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一、概念：

細胞凋亡：由基因控制的細胞自主的有序的死亡，是高度調控的過程，故又稱為細胞的程序性死亡。

二、特征：

細胞壞死是病理狀態(tài)下由損傷因子誘導產(chǎn)生的自溶現(xiàn)象，表現(xiàn)為：細胞皺縮變小、質膜起泡、染色體凝縮、細胞核碎裂、DNA片段化以及吞噬體最終吞噬細胞。

圖1 細胞凋亡與細胞壞死過程

三、檢測試劑盒

1、Annexin V/PI檢測試劑盒

根據(jù)細胞凋亡過程中的變化，可以通過多種途徑對其進行檢測，目前市面上常用的試劑盒包括一下幾種：

Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒（abs50001）

正常細胞中，磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細胞膜脂質雙層的內側，細胞發(fā)生凋亡最早期，PS由翻向外側，這一變化早于細胞皺縮、染色質濃縮、DNA片斷化和細胞膜的通透性增加等凋亡現(xiàn)象。Annexin V與ps有高度親和力，因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一種核酸染料, 它不能透過完整的細胞膜，但凋亡中晚期的細胞和死細胞由于細胞膜通透性的增加，PI能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用，就可以將處于不同凋亡時期的細胞區(qū)分開來。但由于Annexin V本身沒有熒光，因此需要偶聯(lián)熒光基團，以便被流式細胞儀檢測，通常會偶聯(lián)FITC、eGFP、AF488、APC等基團。

選擇原則：若細胞沒有自發(fā)熒光，可以選擇Annexin V-FITC/PI或Annexin V-eGFP/PI。這類試劑盒熒光光譜重疊較小，對實驗人員的技術要求相對較低。

如果細胞本身需要檢測綠色熒光，可以選擇Annexin V-APC/PI或者Annexin V-APC/7AAD組合的試劑盒。但APC和PI的熒光光譜有較大重疊，對檢測儀器和技術人員有較高要求，如果細胞本身需要檢測紅色熒光，則應確認紅色熒光的激發(fā)光和發(fā)射光波長，如果與PI/7AAD的激發(fā)光和發(fā)射光均相似，則不能用這類試劑盒檢測該細胞的凋亡。

2、TUNEL細胞凋亡試劑盒

TUNEL細胞凋亡試劑盒（綠色熒光）abs50047

TUNEL染色熒光圖（綠色）

細胞發(fā)生凋亡時，會激活一些DNA內切酶，這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA，基因組DNA雙鏈或單鏈斷裂時會出現(xiàn)產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端，正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，3'-OH可在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT)的催化作用下，與488/Cy-dUTP結合，從而通過熒光顯微鏡或流式細胞儀直接進行凋亡細胞的檢測，這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉移酶介導的缺口末端標記法(Terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。

選擇指南：Tunel法可以對完整的單個凋亡細胞核或凋亡小體進行原位染色，可檢測出極少量的凋亡細胞，可用于檢測冷凍或石蠟切片中的細胞凋亡情況，也可檢測培養(yǎng)的貼壁細胞或懸浮細胞的凋亡情況。選擇性的檢測凋亡細胞，而非壞死細胞或因輻照和藥物治療而造成的DNA鏈斷裂的細胞。用流式細胞儀檢測或涂片后在熒光顯微鏡下觀察。

3、Caspase 3/7 活性檢測試劑盒

Caspase 3/7活性檢測試劑盒(Caspase 3/7 Activity Assay Kit)是采用分光光度法檢測細胞或組織裂解液中caspase 3/7酶活性或純化的caspase 3/7酶活性的試劑盒。Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一個在細胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 3是哺乳動物細胞中研究最多的caspase。 本試劑盒原理基于Caspase 3/7都可以催化底物Ac-DEVD-pNA產(chǎn)生黃色的pNA（對硝基苯胺），測定405nm附近pNA的吸光度。

4、線粒體膜電位檢測試劑盒

JC-1是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位△Ψm的理想熒光探針?？梢詸z測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。在線粒體膜電位較高時，JC-1聚集在線粒體的基質中，形成聚合物，可以產(chǎn)生紅色熒光；在線粒體膜電位較低時，JC-1不能聚集在線粒體的基質中，此時JC-1為單體，可以產(chǎn)生綠色熒光。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉變來檢測線粒體膜電位的變化。常用紅綠熒光的相對比例來衡量線粒體去極化的比例。線粒體膜電位的下降是細胞凋亡早期的標志性事件。因此該試劑盒可以用于早期的細胞凋亡檢測。

*注：文中圖片來自網(wǎng)絡或參考文獻，僅供學習參考用

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