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腫瘤的免疫主要是T細胞來執(zhí)行的，T細胞是我們體內(nèi)進化的最高等，也是最多樣的一類細胞。T細胞的多樣性由于TCR的豐富多樣，本質(zhì)上由V(D)J重組導致，T細胞受體識別靶細胞表面特異性抗原，一個抗原就對應著一個T細胞克隆，可達10¹⁵-10¹⁸種，每個克隆都具有特殊的TCR。通過正選擇和負選擇的進一步篩選，最終形成大約10⁶到10¹⁰種的循環(huán)T細胞克隆。其中大概一般可能有幾萬種到幾十萬種。是可以識別腫瘤抗原的，叫腫瘤抗原特性T細胞。

TCR結(jié)構(gòu)示意圖

腫瘤抗原特異性T細胞檢測之前必須要了解一下腫瘤免疫循環(huán)理論，它涉及到我們的樣本來源。根據(jù)腫瘤免疫循環(huán)理論，癌細胞釋放腫瘤抗原。腫瘤抗原被抗原遞呈細胞吞噬之后，抗原遞呈細胞就會歸巢，回流到我們的引流淋巴結(jié)，在引流淋巴結(jié)內(nèi)，抗原被抗原遞呈細胞吞噬處理之后就會激活?？梢员荒[瘤抗原的腫瘤抗原特性T細胞識別，這個腫瘤抗原特性T細胞一旦被激活成熟之后。就會進入血液循環(huán)，從而去尋找它的殺傷目標。當它循環(huán)到腫瘤組織中，發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中有對應的腫瘤抗原，就會浸潤到腫瘤組織內(nèi)去殺死腫瘤細胞，這叫腫瘤免疫循環(huán)。所以我們機體內(nèi)有三個位置是有腫瘤抗原性T細胞的，引流淋巴結(jié)、外流血和腫瘤組織。

癌癥-免疫周期

腫瘤抗原特性T細胞理論上來說分為三大類，一類可以識別腫瘤腫瘤抗原，可以殺死這個被識別的含有腫瘤抗原的腫瘤細胞，這類我們叫做效應性腫瘤抗原T細胞，第二大類就是調(diào)節(jié)型腫瘤抗原T細胞，這類細胞可以識別腫瘤抗原，但是對癌細胞沒有殺傷功能，反而因為它會抑制T effect，從而間接促進癌細胞的生長。第三大類是無能型T細胞，它可以識別腫瘤，抗原，也可以識別癌細胞，但識別癌細胞之后，不具有殺傷功能。

腫瘤抗原特性T細胞，是我們機體內(nèi)去特異性識別和殺傷癌細胞的最主要的細胞。腫瘤細胞跟正常的細菌和病毒最大的區(qū)別就是具有高度異質(zhì)性，沒有占主導地位的抗原，很難找到共有通用占主導地位抗原，這也是開發(fā)腫瘤疫苗最大的一個難點，89年研究者發(fā)現(xiàn)了一類可以特異性識別某些腫瘤抗原的T細胞，但目前為止種類不是很多。

腫瘤抗性特性T細胞檢測的應用和檢測意義有哪些呢？

1）癌癥免疫治療藥物研究（PD1抗體、雙特異性抗體等）：經(jīng)過藥物治療后是否增加了腫瘤抗原特異性T細胞的數(shù)量和總含量；

2）新藥物研發(fā)、聯(lián)合用藥等（該治療方法，尤其是化療是否影響了機體內(nèi)抗原特異性T細胞的總含量）；

3）溶瘤病毒研究等（溶瘤病毒殺死癌細胞后是否增加了機體內(nèi)腫瘤抗原特異性T細胞的含量）；

4）癌癥疫苗研發(fā)（新抗原疫苗、mRNA疫苗、DC疫苗等是否誘導了足夠的腫瘤抗原特異性T細胞）；

5）癌癥納米治療藥物研發(fā)（很多納米藥物或者免疫調(diào)節(jié)劑通過誘發(fā)ICD效應發(fā)揮作用，如果誘導產(chǎn)生了ICD效應，應該能增加腫瘤抗原特異性T細胞的總含量）；

6）放射治療：對腫瘤組織不同劑量的放射量（是否能夠通過放射治療誘導機體產(chǎn)生更多的腫瘤抗原特異性T細胞）；

7）光熱治療：通過光敏劑、熱敏劑等殺死癌細胞后，癌細胞釋放的抗原是否誘導產(chǎn)生了更多的腫瘤抗原特異性T細胞。

目前市面上主流的腫瘤抗原特異性T細胞檢測技術(shù)是1996年，美國斯坦福大學John D. Altman博士等人開發(fā)出的MHC-抗原肽復合物四聚體（簡稱：MHC 四聚體）技術(shù)。由于TCR與MHC-抗原肽復合物之間的親和力低，半衰期短，相互結(jié)合后容易快速脫落，重組的可溶性MHC-抗原肽復合物單體并不適合用于抗原特異性的T細胞檢測。

該技術(shù)由4個MHC-抗原肽單體分子及熒光染料組成的復合物，它以帶有信號標記的鏈霉親合素為基礎(chǔ)，交聯(lián)四個MHC分子單體，形成MHC四聚體；與其他應用于T細胞檢測的傳統(tǒng)方法相比，如酶聯(lián)免疫斑點檢測(ELISPOT)、單細胞PCR等，MHC四聚體分析技術(shù)具有：

1）特異性高；

2）穩(wěn)定性好；

3）多樣化/個性化：可定制，合成特異的抗原多肽片段，組合成各種 T 細胞選擇性MHC四聚體；

4）定性/定量分析的優(yōu)勢

MHC-抗原肽復合物四聚體技術(shù)

但是MHC四聚體和ELISPOT技術(shù)存在一些局限：

1）可以使用的抗原肽數(shù)量非常有限，因而只能檢測幾種特定克隆的抗原特異性T細胞；

2）可以檢測到的抗原特異性T細胞種類有限，含量偏低；

3）所使用的抗原肽可能在檢測機體內(nèi)沒有相應的抗原特異性T細胞；

4）檢測的可能不是占主導地位的抗原特異性T細胞和含量最多的抗原特異性T細胞；

5）檢測的抗原特異性T細胞不全面、不準確；

6）價格昂貴；

7）四聚體技術(shù)只能檢測結(jié)構(gòu)上可以識別相應多肽的T細胞，但是是否有殺傷功能無法確認，因而不能進行功能確認。

Absin腫瘤抗原特異性T細胞含量檢測刺激試劑盒

本產(chǎn)品檢測納米顆粒負載癌細胞的全細胞抗原，抗原種類全面、多樣和廣譜，可全面準確檢測不同組織中的腫瘤抗原特異性T細胞。具有特異性高，準確性高，所檢測腫瘤抗原特異性T細胞種類全面等優(yōu)點。測試的結(jié)果顯示使用負載B16F10腫瘤組織全細胞抗原的納米粒與小鼠脾細胞單細胞懸液共孵育激活腫瘤抗原特異性T細胞后，在CD3+T細胞中可以表達IFN-γ的T細胞比例比負載8種B16F10的新抗原多肽的納米粒、以及游離的B16F10腫瘤組織裂解液要多，也更全面。

Absin腫瘤抗原特異性T細胞含量檢測刺激試劑盒測試結(jié)果快問快答：

1）該試劑盒中的納米粒是否會作為刺激物，刺激樣本產(chǎn)生新的種類的腫瘤抗原特異性T細胞？

不會，腫瘤免疫循環(huán)一般只有在體內(nèi)才會完成

2）不使用二次激活物（多肽或者試劑盒中的納米粒）是否可以直接檢測樣本中的腫瘤抗原特異性T細胞？

不行，或者效果很差，樣本不經(jīng)過二次激活所檢測的腫瘤抗原特異性T細胞非常少或沒有。

3）能否直接用腫瘤組織裂解液作為二次激活物？

效果不好，從我們的驗證數(shù)據(jù)中可以得到答案。

4）我想要檢測的腫瘤類型或者物種沒有怎么辦？

愛必信提供定制服務，除腫瘤外，各種傳染病病原也可進行磁珠包被，但需要客戶提供抗原，詳情可點擊腫瘤/傳染病抗原特異性T細胞含量檢測刺激物定制查看。

5）每種腫瘤都有不修飾、OVA修飾和fluc修飾三種盒子，該如何選擇？

與構(gòu)建腫瘤模型時是否修飾有關(guān)，建議相匹配。

6）小鼠樣本建議是用什么組織樣本進行測試？

優(yōu)先推薦使用脾臟，血液中含量較少，可能需要多個小鼠血液混合才能達到數(shù)量要求。

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