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一文了解TR-FRET技術(shù)

閱讀:409      發(fā)布時(shí)間:2024-9-24
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什么是TR-FRET?

 

TR-FRET(Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer,時(shí)間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移)是一種用于研究分子間相互作用的生物物理技術(shù)。它結(jié)合了兩種技術(shù):熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)時(shí)間分辨熒光(TRF,Time-Resolved Fluorescence)。

 

熒光共振能量轉(zhuǎn)移原理圖

 

熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)是一種物理現(xiàn)象,其中一個(gè)熒光分子(供體)在吸收光能后,可以將激發(fā)能量非放射性地傳遞給另一個(gè)分子(受體),如果受體在空間上足夠接近供體(通常在1-10納米范圍內(nèi))。這種能量轉(zhuǎn)移的效率與供體和受體之間的距離的六次方成反比,因此可以用來研究分子間的接近程度和相互作用。

 

時(shí)間分辨熒光原理圖

 

時(shí)間分辨熒光(TRF)是一種測量熒光壽命的技術(shù),它通過在停止激發(fā)光源后測量熒光衰減來區(qū)分短壽命的背景熒光和長壽命的信號(hào)熒光。這允許在激發(fā)后的一個(gè)特定時(shí)間窗口內(nèi)測量熒光,從而減少背景干擾,提高信號(hào)的信噪比。

 

在TR-FRET中,通常使用長壽命的供體熒光團(tuán),如鑭系元素(如銪或鋱)的螯合物,這些供體的熒光壽命較長,可以在激發(fā)后的一個(gè)延遲時(shí)間內(nèi)被檢測,此時(shí)短壽命的背景熒光已經(jīng)衰減。受體熒光團(tuán)通常是有機(jī)染料或另一種金屬螯合物,其發(fā)射波長與供體的發(fā)射波長不同。

 

TR-FRET能做什么?

 

受體結(jié)合研究:

例如,研究者可能對(duì)一種新藥如何與心臟藥物靶標(biāo)β-腎上腺素受體結(jié)合感興趣??梢詫ⅵ?腎上腺素受體標(biāo)記上銪(Eu)作為供體,將藥物分子標(biāo)記上一個(gè)合適的受體熒光團(tuán)。

當(dāng)藥物與受體結(jié)合時(shí),觀察到的FRET信號(hào)增加,從而可以定量分析藥物的結(jié)合親和力。

 

酶活性檢測:

假設(shè)要研究一種新型抑制劑對(duì)酪氨酸激酶活性的影響??梢詫⒓っ傅牡孜飿?biāo)記上供體熒光團(tuán),并將激酶標(biāo)記上受體熒光團(tuán)。在沒有抑制劑的情況下,激酶會(huì)磷酸化底物,導(dǎo)致兩者分離,F(xiàn)RET信號(hào)減少。添加抑制劑后,如果FRET信號(hào)保持高水平,表明抑制劑阻止了激酶的活性。

 

蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用:

研究腫瘤抑制蛋白p53與MDM2之間的相互作用。將p53標(biāo)記上供體熒光團(tuán),將MDM2標(biāo)記上受體熒光團(tuán)。當(dāng)p53與MDM2相互作用時(shí),F(xiàn)RET信號(hào)增加,可以用來研究這種相互作用的動(dòng)力學(xué)和調(diào)控機(jī)制。

 

藥物篩選:

在藥物開發(fā)過程中,TR-FRET可以用來高通量篩選化合物庫,以找到與特定靶標(biāo)結(jié)合的潛在藥物候選物。

例如,通過將G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)標(biāo)記上供體和受體熒光團(tuán),可以篩選能夠激活或抑制該受體的化合物。

 

與ELISA相比,TR-FRET有什么優(yōu)缺點(diǎn)?

 

abs7311微孔板(384孔板,白色,淺孔)

 

與ELISA相比,TR-FRET具有以下優(yōu)點(diǎn)

高靈敏度:TR-FRET技術(shù)利用長壽命的熒光標(biāo)記(如鑭系元素),可以在較長時(shí)間內(nèi)檢測到信號(hào),從而提高檢測的靈敏度;

高穩(wěn)定性:由于使用了時(shí)間分辨檢測,可以減少背景噪聲,提高信號(hào)的穩(wěn)定性;

無需洗滌步驟:TR-FRET實(shí)驗(yàn)通常是均相的,不需要洗滌步驟,簡化了操作流程;

節(jié)省樣本:TR-FRET搭配96孔板(abs7308微孔板(96孔板,白色,淺孔)或384孔板(abs7311微孔板(384孔板,白色,淺孔),384孔板一般每孔僅需要10uL樣本;

線性范圍廣:可以同時(shí)檢測高濃度和低濃度的樣品;

快速:TR-FRET實(shí)驗(yàn)通??梢栽?h內(nèi)完成,包括信號(hào)的產(chǎn)生和檢測。

 

但是由于TR-FRET實(shí)驗(yàn)需要特殊的熒光標(biāo)記和時(shí)間分辨熒光讀板機(jī)(TRF Reader),這可能比傳統(tǒng)的ELISA成本更高。技術(shù)層面,TR-FRET技術(shù)可能需要更多的技術(shù)知識(shí)和專業(yè)設(shè)備來進(jìn)行實(shí)驗(yàn)和數(shù)據(jù)分析。

 

absin能為客戶提供的TR-FRET產(chǎn)品有哪些?

 

除以上提到的96孔和384孔微孔板以外,absin還可以提供Human KRAS & cRAF系列、Human IgG系列、DDB1-CRBN&GSPT1系列的檢測試劑盒。

 

1、Human KRAS & cRAF系列

 

 

1)省力:無需洗滌;

2)省時(shí):僅需1h孵育;

3)省樣本:20uL/孔或更低反應(yīng)體系;

4)高通量:96/384/1536微孔板均可搭配。

 


貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

abs560003

Human KRAS WT&cRAF Binding Kit

500T

abs560004

Human KRAS G12C&cRAF Binding Kit

500T

abs560005

Human KRAS G12D&cRAF Binding Kit

500T

abs560006

Human KRAS G12R&cRAF Binding Kit

500T

abs560007

Human KRAS G12V&cRAF Binding Kit

500T

abs560008

Human KRAS G13C&cRAF Binding Kit

500T

abs560009

Human KRAS G13D&cRAF Binding Kit

500T

abs560010

Human KRAS Q61H&cRAF Binding Kit

500T




 

數(shù)據(jù)實(shí)例(以abs560004 Human KRAS G12C&cRAF Binding Kit為例):

 

以下數(shù)據(jù)不能代替實(shí)驗(yàn)中獲得的數(shù)據(jù),只作為示例,結(jié)果可能因TR-FRET兼容儀器而異。

 

 

2、Human IgG 系列

 

abs560002 Human Total IgG Kit(Assay Pro) 競爭法

 

abs560011 Human IgG Sandwich Assay Kit 夾心法

 


貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

樣品濃度范圍

abs560002

Human Total IgG Kit(Assay Pro)

100T/500T/10000T

1.22-80000ng/mL

abs560011

Human IgG Sandwich Assay Kit

100T/500T/5000T/10000T

3.9-4000ng/mL




 

數(shù)據(jù)實(shí)例

以下數(shù)據(jù)不能代替實(shí)驗(yàn)中獲得的數(shù)據(jù),只作為示例,結(jié)果可能因TR-FRET兼容儀器而異。

 

? abs560002 Human Total IgG Kit(Assay Pro) 競爭法

 

 

? abs560011 Human IgG Sandwich Assay Kit 夾心法

 

 

3、Human DDB1-CRBN&GSPT1系列

 

 

用于測定分子膠CC-885及待檢測化合物介導(dǎo)的DDB1/CRBN復(fù)合體與GSPT1相互作用。是實(shí)現(xiàn)簡單快速的檢測能夠介導(dǎo)DDB1/CRBN復(fù)合體與GSPT1相互作用的小分子的高通量方法。

 


貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

abs560012

Human DDB1-CRBN&GSPT1 Binding Kit

500T




 

數(shù)據(jù)示例

以下數(shù)據(jù)不能代替實(shí)驗(yàn)中獲得的數(shù)據(jù),只作為示例,結(jié)果可能因TR-FRET兼容儀器而異。

 


Absin產(chǎn)品線:

爆款產(chǎn)品:試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測);細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠,胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒;分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒);化合物大包裝;輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...

特色產(chǎn)品:雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...

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