分泌蛋白質(zhì)組(secretome)是指細(xì)胞、組織等分泌的全部蛋白質(zhì)。分泌蛋白（如細(xì)胞因子、生長因子和激素等）在細(xì)胞間信號傳遞等過程中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用，其動態(tài)變化通常反映了細(xì)胞的生長情況和病理狀態(tài)。分泌蛋白構(gòu)成了很大一部分藥物靶標(biāo)，同時也是重要的生物標(biāo)志物[1]。細(xì)胞的條件培養(yǎng)基是分泌蛋白質(zhì)組研究的重要樣本。
目前，基于生物質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)分析可以實(shí)現(xiàn)對分泌蛋白的系統(tǒng)研究[2]，但該方法無法富集分泌蛋白，導(dǎo)致分泌蛋白的鑒定數(shù)目較少。此外，常規(guī)的分泌蛋白質(zhì)組分析為了降低樣品的復(fù)雜性會使用無血清培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，而長時間無血清培養(yǎng)容易使細(xì)胞活性狀態(tài)改變。
圖1 蛋白糖基化后結(jié)合質(zhì)譜分析的分泌蛋白富集流程圖[3]
近年來，含有生物正交基團(tuán)（如疊氮基）的非天然糖已被用于代謝標(biāo)記糖基化蛋白質(zhì)，從而實(shí)現(xiàn)對糖蛋白的細(xì)胞成像或選擇性富集并用于蛋白質(zhì)組學(xué)分析。
該策略分為兩個步驟：
疊氮基糖類似物（圖1a）被添加到細(xì)胞培養(yǎng)基中，通過細(xì)胞內(nèi)的聚糖生物合成途徑引入到糖蛋白上；然后通過點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)特異性地與成像探針或親和探針進(jìn)行共價標(biāo)記（圖1b）。由于分泌蛋白通常是糖蛋白，這種糖代謝標(biāo)記已被用于分泌蛋白的標(biāo)記和富集。N-疊氮乙酰半乳糖胺(GalNAz)、N-疊氮乙酰葡萄糖胺(GlcNAz)和N-疊氮乙酰甘露糖胺(ManNAz)是經(jīng)典的疊氮基糖類似物，其應(yīng)用見表1。
表1 幾種常用疊氮基糖代謝探針[4-6]
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品描述 |
N-疊氮乙酰甘露糖胺(ManNAz) | ManNAz是唾液酸的生物合成前體N?乙酰甘露糖胺(ManNAc)的類似物，可以標(biāo)記唾液酸化的N?或O?糖蛋白。 |
N-疊氮乙酰葡萄糖胺(GlcNAz) | GlcNAz是N?乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)的類似物，通常用于標(biāo)記帶有β?O?GlcNAc殘基的核糖蛋白和細(xì)胞質(zhì)糖蛋白，但是也能通過GALE轉(zhuǎn)化為GlcNAz從而標(biāo)記N?糖蛋白與黏蛋白型O?糖蛋白。 |
N-疊氮乙酰半乳糖胺(GalNAz) | GalNAz是N?乙酰半乳糖胺(GalNAc)的類似物，可以替代GalNAc成為黏蛋白型O?聚糖的核心殘基從而標(biāo)記O?糖蛋白。此外，GalNAz在細(xì)胞內(nèi)的代謝中間體尿苷二磷酸(UDP)-GalNAz可經(jīng)過UDP半乳糖-4-差向異構(gòu)酶(GALE)催化而與UDP- GlcNAz相互轉(zhuǎn)化，因此也可替代GlcNAc對N?糖蛋白和O-GlcNAc糖蛋白進(jìn)行標(biāo)記。 |
隨著技術(shù)的發(fā)展，以上3種常用的商品化非天然糖代謝標(biāo)記產(chǎn)品（表1）演化為Ac4ManNAz、Ac4GlcNAz和Ac4GalNAz，它們分別是四酰化的N-疊氮乙酰甘露糖胺、N-疊氮乙酰葡萄糖胺和N-疊氮乙酰半乳糖胺，?；笤黾恿似湓谠S多溶劑中的溶解度，使這種試劑的處理更容易。
近期我司新推出升級了疊氮基糖，特點(diǎn)：
※ 生物正交性——疊氮基基團(tuán)較小，無反應(yīng)性且不存在于生命系統(tǒng)中，因此疊氮基-糖化合物不會干擾內(nèi)源性細(xì)胞通路和取代其自然發(fā)生的類似物；
※ 兼容性——在簡單的緩沖液條件下可有效使用磷酸化合物進(jìn)行反應(yīng)化學(xué)，不需要銅或還原劑等輔助試劑；
※ 化學(xué)選擇性——疊氮化物和膦基團(tuán)不會與生物樣品的組分反應(yīng)或干擾此類組分，而是彼此高效偶聯(lián)；
※ 通用性——疊氮化物標(biāo)記可用于檢測、固定、偶聯(lián)或親和純化，具體取決于其與哪種膦活化化合物反應(yīng)。
這些糖是天然單糖的疊氮化物衍生物，細(xì)胞使用翻譯后修飾生化途徑使蛋白糖基化。疊氮化物官能團(tuán)很小且不與內(nèi)源性分子發(fā)生反應(yīng)。當(dāng)輸送到細(xì)胞時，這些化合物被糖基化事件整合，以便有效地使用疊氮化物基團(tuán)“標(biāo)記"糖蛋白。然后疊氮化物基團(tuán)可專門用于使用炔烴活化試劑（“點(diǎn)擊"化學(xué)）或膦活化試劑（Staudinger連接）進(jìn)行檢測或偶聯(lián)。
當(dāng)與膦活化熒光染料、生物素試劑或其他化合物結(jié)合使用時，這些疊氮基修飾的糖有助于研究涉及糖基化的細(xì)胞通路。
產(chǎn)品信息：
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨期 |
abs47048299 | GlcNAz | 25mg | 1-2周 |
abs47048296 | Ac4GlcNAz | 100mg | 1-2周 |
abs47048300 | GalNAz | 50mg | 1-2周 |
abs47048297 | Ac4GalNAz | 50mg | 1-2周 |
abs47048301 | ManNAz | 100mg | 1-2周 |
abs47048298 | Ac4ManNAz | 100mg | 1-2周 |
abs47048303 | Kdo Azide | 1g | 1-2周 |
溫馨提示：Absin所有產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究，請勿藥物、家用或其他用途。
參考文獻(xiàn)
[1] Miroslava Stastna, Jennifer E Van Eyk. Secreted proteins as a fundamental source for biomarker discovery[J]. Proteomics 2012, 12:722-735.
[2] Brown K J, Formolo1C A, Seol H, et al. Advances in the proteomic investigation of the cell secretome[J].
Expert Rev. Proteomic,2012,9(3):337-345.
[3] 毛源, 鄭江南, 封順, 等. 基于3種非天然糖代謝標(biāo)記的分泌蛋白質(zhì)組分析性能對比[J]. 色譜, 2021, 39(10):8.
[4] Laughlin S T, Bertozzi C R. Metabolic labeling of glycans with azido sugars and subsequent glycan-profiling and visualization via Staudinger ligation[J]. Nature Protocols, 2007,2(11):2930-2944.
[5] Boyce M, Carrico I S, Ganguli A S, et al. Metabolic cross-talk allows labeling of O-linked beta-N-acetylglucosamine-modified proteins via the N-acetylgalactosamine salvage pathway[J].PNAS, 2011,108(8):3141-3146.
[6] Nandi A, Sprung R, Barma D K, et al.Global identification of O-GlcNAc-modified proteins[J]. Anal. Chem. 2006, 78, 452-458.
Absin特色產(chǎn)品線：
WB相關(guān)：ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠；IHC相關(guān)：二抗試劑盒、組化筆；IP/CoIP試劑盒；激動劑/抑制劑；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡試劑盒；呼吸爆發(fā)試劑盒；ELISA試劑盒；重組蛋白；抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體、對照抗體；定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...
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