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預(yù)染marker高特異性的能力

閱讀:1408      發(fā)布時(shí)間:2017-8-18
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  預(yù)染marker可直接凝膠上樣,無需煮沸。條帶清晰 – 亮度類似,但顏色不同的條帶便于觀察。質(zhì)量檢測 – 每批次均經(jīng)過SDS-PAGE 和Western blotting 驗(yàn)證。兩個(gè)參考條帶 – 70kDa 為橙色,10kDa 為綠色。與膜兼容 – Western blotting 時(shí)彩色條帶將轉(zhuǎn)移到膜上應(yīng)用,監(jiān)測SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳期間蛋白的遷移。監(jiān)測Western blotting 蛋白轉(zhuǎn)移到膜上的情況。測定SDS 聚丙烯酰胺凝膠和Western blots 上的蛋白分子量。
 
  預(yù)染marker可提高特異性的識別能力。在做westen blot時(shí),用惰性蛋白質(zhì)或非離子去污劑封閉膜上的未結(jié)合位點(diǎn)可以降低抗體的非特異性結(jié)合。封閉劑應(yīng)該封閉所有未結(jié)合位點(diǎn)而不替換膜上的靶蛋白、不結(jié)合靶蛋白的標(biāo)委、也不與抗體或檢測試劑有交叉反應(yīng)。zui常見的封閉劑是BSA、脫脂奶粉、酪蛋白、明膠和Tween-20(0.05 - 0.1%)稀溶液。
  
  預(yù)染marker在電泳過程中或者轉(zhuǎn)膜時(shí)可以直接觀察到。預(yù)染蛋白分子量的出現(xiàn)方便了我們的實(shí)驗(yàn),這種蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)可以幫助我們在電泳時(shí)、電泳后,以及轉(zhuǎn)膜后監(jiān)測電泳情況和估計(jì)遷移率——比如,已知垂直電泳*分辨區(qū)域大約在膠的2/3處,如果使用預(yù)染Marker就可以預(yù)測目標(biāo)蛋白進(jìn)入*分辨區(qū)時(shí)停止電泳以得到*分辨效果;如果觀察到Marker電泳異常也可以及時(shí)終止電泳;另外在Western Blot轉(zhuǎn)膜以后可以直接觀察蛋白轉(zhuǎn)膜是否*,還可以在膜上標(biāo)記蛋白分子量,所以吸引了許多實(shí)驗(yàn)室人員購買預(yù)染蛋白標(biāo)準(zhǔn)。

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