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分子生物學(xué)

核酸提取/純化

qPCR系列

mRNA合成

轉(zhuǎn)染產(chǎn)品

分子克隆

其它分子生物學(xué)試劑

CAS	-	純度	-
分子量	-	分子式	-
供貨周期	現(xiàn)貨	規(guī)格	100T
貨號(hào)	abs60371	應(yīng)用領(lǐng)域	化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合
主要用途	-

SfiI 快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過(guò)基因工程重組的快速限制性?xún)?nèi)切酶，適用于質(zhì)粒 DNA、PCR 產(chǎn)物或基因組 DNA 等的快速酶切。所有快速內(nèi)切酶在通用的 CutOne 或 CutOne ColorBuffer 中都具有優(yōu)良的活性，能夠在 5~15 分鐘內(nèi)完成酶切。

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品描述

描述

SfiI 快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過(guò)基因工程重組的快速限制性?xún)?nèi)切酶，適用于質(zhì)粒 DNA、PCR 產(chǎn)物或基因組 DNA 等的快速酶切。所有快速內(nèi)切酶在通用的 CutOne 或 CutOne ColorBuffer 中都具有優(yōu)良的活性，能夠在 5~15 分鐘內(nèi)完成酶切。此外，去磷酸化、連接試劑在 CutOne Buffer 中均具有 100% 活性，支持一管化反應(yīng)，提升“酶切 - 修飾 - 連接"的體驗(yàn)。CutOne Color Buffer 包括紅色和黃色示蹤染料，可將產(chǎn)物直接用于凝膠電泳。CutOne Color Buffer 的紅色染料與 2500 bp 雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近；黃色染料與 10 bp雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。

識(shí)別位點(diǎn)：
5'...G G C C N N N N ↓ N G G C C...3'
3'...C C G G N ↑ N N N N C C G G...5'

建議反應(yīng)條件：
1× CutOne™ 緩沖液；
50℃溫育；
參照“DNA 快速酶切流程"配制反應(yīng)體系。

失活條件：
不可熱失活，請(qǐng)使用酚氯仿抽提或柱純化。

產(chǎn)品組成：

組分	規(guī)格
SfiI	100 μl
10× CutOne Buffer	1 ml
10× CutOne Color Buffer	1 ml

使用方法

使用方法
1、DNA 快速酶切流程
（1）在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系：

組分	質(zhì)粒 DNA	PCR 產(chǎn)物	基因組 DNA
ddH2O	15ul	16ul	30ul
10× CutOne Buffer 或 10× CutOne Color Buffer	2ul	3ula	5ul
底物 DNA	2ul (up to 1ug)	10ul (~0.2ug)	10ul (5ug)
SfiI	1ul	1ul	5ul
Total	20ul	30ul	50ul

a. 本體系適用于經(jīng)過(guò)純化的 PCR 產(chǎn)物酶切。未純化的 PCR 產(chǎn)物具備一定的離子強(qiáng)度，10× Cutone Buffer 加入量可適當(dāng)減少至 2 μl。但由于 DNA 聚合酶同時(shí)具有外切酶活性，會(huì)影響酶切產(chǎn)物，因此如下一步需進(jìn)行（2）輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴；
（3）50℃溫育 15 min（質(zhì)粒），或 15~30 min（PCR 產(chǎn)物），或 30~60 min（基因組 DNA）；
（4）酚氯仿抽提或柱純化（可選）；

（5）如果使用 CutOne Color Buffer 進(jìn)行酶切反應(yīng)，得到的產(chǎn)物可以直接進(jìn)行上樣電泳。

2、雙酶切或多酶切
（1）每種快速內(nèi)切酶的用量為 1 μl，并根據(jù)需要適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)體系；
（2）所有快速內(nèi)切酶的體積總和不得超過(guò)總反應(yīng)體系的 1/10；

（3）如果所用的幾種快速內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度不同，應(yīng)先以最適溫度低的酶開(kāi)始酶切，再添加最適溫度較高的酶，在其最適反應(yīng)溫度下進(jìn)行酶切反應(yīng)。

3、適用于質(zhì)粒的擴(kuò)大反應(yīng)體系

DNA	1ug	2ug	3ug	4ug	5ug
SfiI	1ul	2ul	3ul	4ul	5ul
10× CutOne Buffer 或 10× CutOne Color Buffer	2ul	2ul	3ul	4ul	5ul
Total	20ul	20ul	30ul	40ul	50ul

不同 DNA 中的酶切位點(diǎn)數(shù)量

λDNA	ΦX174	pBR322	pUC57	pUC18/19	SV40	M13mp18/19	Adeno2
0	0	0	0	0	1	0	3

甲基化修飾影響

Dam	Dcm	CpG	EcoKI	EcoBI
無(wú)影響	剪切受影響	剪切受影響	無(wú)影響	無(wú)影響

在不同反應(yīng)緩沖液中的活性

CutOne Buffer

Thermo Scientific

FastDigest Buffer

NEB

CutSmart® Buffer

Takara

QuickCut™ Buffer

活性

100%

儲(chǔ)存/保存方法

-20°C 及以下運(yùn)輸及保存，長(zhǎng)期保存建議放 80°C 。有效期2年。

技術(shù)指標(biāo)

質(zhì)量控制：
功能活性檢測(cè)：
50℃下，在 20 μl 通用 CutOne 反應(yīng)體系中，1 μl SfiI 能夠在 15 min 內(nèi)消化 1 μg pEPE DNA。
超長(zhǎng)時(shí)間溫育檢測(cè)：
50℃下，在 20 μl 通用 CutOne 反應(yīng)體系中，將 1 μl SfiI 與 1 μg pEPE DNA 共同溫育 3 h，未檢測(cè)到其他核酸酶污染或星號(hào)活性引起的底物非特異性降解。更長(zhǎng)時(shí)間酶切可能出現(xiàn)星號(hào)活性。
酶切 - 連接 - 再酶切檢測(cè)：
50℃下，使用 10 倍酶量的 SfiI 消化 DNA 底物，回收酶切產(chǎn)物，在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast) 可以將超過(guò) 95%的酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開(kāi) 95% 以上的連接產(chǎn)物。
非特異性?xún)?nèi)切酶活性檢測(cè)：
50℃下，在 20 μl 通用 CutOne 反應(yīng)體系中將 1 μl SfiI 與 1 μg 超螺旋質(zhì)粒 DNA 共同溫育 4 h 后，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，少于 10% 的質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)變成缺刻或線性狀態(tài)。

溫馨提示：本產(chǎn)品僅作科研實(shí)驗(yàn)使用，不支持臨床等研究