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大鼠纖維母細(xì)胞；1/EJ 1-1細(xì)胞凍存指導(dǎo)原則：

冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲(chǔ)存。-20℃不可超過(guò)1小時(shí)，以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，也可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。

凍存細(xì)胞系以備將來(lái)之用時(shí)，必須遵守以下原則。與其他細(xì)胞培養(yǎng)操作一樣，我們建議您嚴(yán)格遵守您所用細(xì)胞系附帶的操作說(shuō)明，以便獲得最佳結(jié)果。 

 

1）在高細(xì)胞濃度情況下進(jìn)行培養(yǎng)細(xì)胞的凍存，并且細(xì)胞傳代次數(shù)盡可能少。確保凍存前活細(xì)胞百分比至少為90%。請(qǐng)注意最佳凍存條件取決于所用細(xì)胞系。 

2）細(xì)胞應(yīng)緩慢冷凍，可使用可控制降溫速度的低溫冰箱或者低溫冷凍容器使溫度每分鐘大約降低1°C。

3）必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑

4）將冷凍的細(xì)胞于 -70°C 以下溫度儲(chǔ)存；溫度高于 -50°C 時(shí)，冷凍的細(xì)胞將開(kāi)始變質(zhì)。 

5）必須使用無(wú)菌凍存管儲(chǔ)存冷凍的細(xì)胞。裝有冷凍細(xì)胞的凍存管可浸于液氮或者在液氮上方的氣相空間內(nèi)保存 

6）必須穿戴個(gè)人防護(hù)設(shè)備。 

7）所有與細(xì)胞接觸的溶液和設(shè)備均應(yīng)為無(wú)菌狀態(tài)。必須采用正確的無(wú)菌技術(shù)，并且在層流通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行。