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大鼠c-fos elisa酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟
閱讀:274 發(fā)布時(shí)間:2022-11-30大鼠c-fos elisa酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟:
1.編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50µl。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復(fù) 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10 分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
計(jì)算和結(jié)果判定:
試驗(yàn)有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定:樣品 OD 值< 臨界值(CUT OFF)者為金黃色葡萄球菌腸毒素(SE)陰性 陽性判定:樣品 OD 值≥ 臨界值(CUT OFF)者為金黃色葡萄球菌腸毒素(SE)陽性。
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