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神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞;H4操作步驟
閱讀:81 發(fā)布時(shí)間:2024-11-27神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞;H4操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過(guò)細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái),吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng),未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000~2000g 離心 1min,沉淀細(xì)胞,盡量去除細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
在組織的消化過(guò)程中,首先需將選取的組織樣本剪切成細(xì)小的碎片,以便于消化酶更好地滲透和作用。隨后,將這些碎片轉(zhuǎn)移至含有適量生物 Trypsin-EDTA solution 或其他適宜組織消化酶的容器中,根據(jù)組織的類型和硬度,消化時(shí)間可從數(shù)分鐘至數(shù)小時(shí)不等,期間需不時(shí)觀察并輕柔振蕩,以促進(jìn)消化均勻進(jìn)行。
當(dāng)觀察到組織碎片已明顯分散成單個(gè)細(xì)胞或較小的細(xì)胞團(tuán)塊時(shí),表明消化過(guò)程基本完成。此時(shí),應(yīng)立即終止消化,可通過(guò)加入含有血清的細(xì)胞培養(yǎng)液來(lái)中和消化酶。使用吸管或移液器輕輕吹打消化液,以促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)一步分散。
之后,將含有消化后細(xì)胞的懸液通過(guò)細(xì)胞篩網(wǎng)過(guò)濾,以去除未消化的組織碎片和雜質(zhì)。接著,將過(guò)濾后的細(xì)胞懸液進(jìn)行離心處理,轉(zhuǎn)速同樣控制在1000~2000g,離心時(shí)間1~2分鐘,以沉淀細(xì)胞。離心后,小心吸除上清液,再加入含血清的培養(yǎng)液,輕輕吹打重懸細(xì)胞,使其達(dá)到適宜的濃度和活性狀態(tài),為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作如細(xì)胞培養(yǎng)、分析或分離特定類型細(xì)胞等做好準(zhǔn)備。