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詳細(xì)介紹
非凍型組織DNA保存液原理是由一對(duì)引物介導(dǎo)，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
?、僖锱c模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
非凍型組織DNA保存液 | 250mL | GOY-P4018 |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
特點(diǎn) ：
本試劑盒可用于檢測(cè)食品或其他材料中是否有的成分。現(xiàn)代食品加工工藝改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性，因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無法對(duì)食材的真?zhèn)芜M(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定。同時(shí)部分食材還有致敏性，因此基于基因檢測(cè)的快速靈敏的食材來源檢測(cè)技術(shù)將對(duì)食品監(jiān)管和安全提供重要的保障。本產(chǎn)品就是為滿足這一需求根據(jù) PCR 原理開發(fā)的產(chǎn)品，它具有下列特點(diǎn)：
1. 一管式操作，用戶只需要提供樣品即可。
2. 根據(jù)大豆熱休克蛋白基因保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物，能專一性檢測(cè)出樣品中的大豆成分，但不能檢測(cè)其他非大豆成分。
3. 快速，整個(gè)檢測(cè)過程（按一個(gè)樣品計(jì)）所需時(shí)間僅為 2.0 小時(shí)。
4. 只需要普通 PCR 儀和凝膠電泳儀，無需配置貴重儀器設(shè)備。
5. 對(duì)混合樣品中大豆成分的檢測(cè)下限為 0.1%，對(duì)樣品中大豆成分的核酸檢測(cè)下限為 1.0ng/μL。
6. 本只能用于科研，足夠 50 次 40uL 體系的常規(guī) PCR。
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
Goat Complement 4,C4 ELISA Kit猴hs-CRP elisa檢測(cè)試劑盒Icariside E5
Goat Complement 3,C3 ELISA Kit猴IFN-α elisa檢測(cè)試劑盒Cleomiscosin C
Goat Malondialdehyde,MDA ELISA Kit猴IFN-β elisa檢測(cè)試劑盒Phyllanthin
Goat Extracellular superoxide dismutase[Cu-Zn](SOD3)ELISA kit猴IFN-γ elisa檢測(cè)試劑盒Niranthin
Goat Interleukin 6,IL-6 ELISA Kit猴IGF-1 elisa檢測(cè)試劑盒Hypophyllanthin
Goat Interleukin 4,IL-4 ELISA Kit猴IgG elisa檢測(cè)試劑盒Spathulatol
Goat Interleukin-2 receptor,IL-2R ELISA kit猴IL-15 elisa檢測(cè)試劑盒Dehydrodiconiferyl alcohol
Goat Interleukin 2,IL-2 ELISA Kit猴IL1A elisa檢測(cè)試劑盒Sesamin
Goat Interleukin 1β,IL-1β ELISA Kit猴IL-2 elisa檢測(cè)試劑盒Hierochin D
Goat Interleukin 1α,IL-1α ELISA Kit猴IL-2R elisa檢測(cè)試劑盒erythro-Guaiacylglycerol β-coniferyl ether
Goat Interleukin-18,IL18/IGIF ELISA kit猴IL-6 elisa檢測(cè)試劑盒trans-Hinokiresinol
Goat Interleukin 10,IL-10 ELISA Kit猴iNOS elisa檢測(cè)試劑盒Lyoniresinol
Goat pro-opiomelanocortin,POMC ELISA Kit猴INS elisa檢測(cè)試劑盒7-Oxohinokinin
Goat Interferon γ ,IFN-γ ELISA Kit猴KLH elisa檢測(cè)試劑盒Formosanol
Goat beta-lipotropin,β-LP ELISA Kit猴L(fēng)EP elisa檢測(cè)試劑盒Tupichilignan A
Goat Beta-Endorphin,β-EP ELISA Kit猴L(fēng)MA elisa檢測(cè)試劑盒Dimethylmatairesinol
非凍型組織DNA保存液SGK1 (Thr256) 磷酸化糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)激酶1抗體規(guī)格 0.1ml
SGK1 (Ser78) 磷酸化糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)激酶1抗體規(guī)格 0.1ml
SGK1 (Ser422) 磷酸化糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)激酶1抗體規(guī)格 0.1ml
SEK1/MKK4 (Thr261) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體規(guī)格 0.1ml
SEK1/MKK4 (Ser257/Thr261) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體規(guī)格 0.1ml
SEK1/MKK4 (Ser257) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體規(guī)格 0.1ml
SCNN1B(Thr615) 磷酸化上皮鈉通道β2抗體規(guī)格 0.1ml
使用方法：
注：所有試劑使用前需*解凍，混合均勻，6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1.樣本處理（樣本處理區(qū)）
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動(dòng)化核酸提取儀等，具體提取方法請(qǐng)參照相關(guān)說明書；陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取，可直接使用。
2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備（PCR前準(zhǔn)備區(qū)）
取N個(gè)（N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品）PCR反應(yīng)管，每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量，兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s，轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣（樣本處理區(qū)）
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl，蓋緊管蓋，于6,000rpm離心10s，轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。
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