詳細(xì)介紹
馬生殖泰勒氏菌PCR檢測(cè)試劑盒品牌使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大小)或直徑約為0.5-0.7 cm(或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當(dāng)于PCR 體積的1/10)作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
馬生殖泰勒氏菌PCR檢測(cè)試劑盒品牌 | 50T | PCR檢測(cè)試劑盒 |
樣本采集、存放及運(yùn)輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h,-70℃以下可長(zhǎng)期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次);
3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
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自備物品:
馬生殖泰勒氏菌PCR檢測(cè)試劑盒品牌15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份
SCaBER(人膀胱鱗細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
IR983F(大鼠骨髓瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
COS-1(非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)的腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
GBC-SD, 人膽囊細(xì)胞
小鼠外周血白細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
BCIP/NBT堿性磷酸酶顯色試劑40ml國(guó)產(chǎn)
小鼠成纖維細(xì)胞英文名稱:NIH 3T3
Hanks’ Balanced Salt Solution規(guī)格:500ml
人胃順鉑耐藥株英文名稱:SGC7901/DDP
M17肉湯/M17 Broth牛奶和制品中酸菌檢測(cè)和分離培養(yǎng)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
人脈絡(luò)膜微血管細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
馬生殖泰勒氏菌PCR檢測(cè)試劑盒品牌CRTAM CRTAM抗體 0.2ml
GAJ/MND1 減數(shù)分裂核分裂蛋白1抗體 0.2ml
Brucella 布氏桿菌菌體蛋白抗體 0.2ml
Rabbit anti-MG IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgG 0.1ml
Mouse Anti-Rabbit IgM/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗兔IgM 0.1ml
TLR5 Toll樣受體5抗體 0.1ml
PRL 泌乳素抗體 0.2ml
ENO1 MYC啟動(dòng)子結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
beta-Amyloid 1-40(CT) β淀粉樣肽1-40(C端)抗體 0.1ml
phospho-Cdc25B (Ser323) 磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白25B抗體 0.1ml
REM/GTP binding protein REM1 GTP結(jié)合蛋白R(shí)EM1抗體 0.2ml
G protein beta 2/GNB2 G蛋白β2抗體/鳥(niǎo)嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白β亞基2 0.2ml
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。