詳細(xì)介紹
反應(yīng)五要素:
西尼羅河病毒(WNV)核酸檢測(cè)試劑盒方法參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm(或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當(dāng)于PCR 體積的1/10)作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 分類(lèi) |
西尼羅河病毒(WNV)核酸檢測(cè)試劑盒方法 | 48T | PCR檢測(cè)試劑盒 |
樣本采集、存放及運(yùn)輸:
1、樣本采集:各類(lèi)型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h,-70℃以下可長(zhǎng)期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次);
3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
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自備物品:
西尼羅河病毒(WNV)核酸檢測(cè)試劑盒方法15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份
1,5-萘二磺鈉英文名稱(chēng):1,5- naphthalene two sulfonic acidCAS號(hào):1655-29-4分子式:332.25334分子量: C10H6Na2O6S2
聚(甲)硅烷支撐鈀/氧鋁混合催劑分子式:分子量:英文名稱(chēng):Poly (Jia Benji) silane supported palladium / alumina catalystCAS號(hào):#$!!#
三氯三乙絡(luò)鋁分子式:247.51分子量: C6H15Al2Cl3英文名稱(chēng):Three chlorine three ethylCAS號(hào):12075-68-2
間二(三氟甲)分子式:214.11分子量: C8H4F6英文名稱(chēng):Between two (three f) benzeneCAS號(hào):402-31-3
對(duì)溴甲分子式:171.04分子量: C7H7Br英文名稱(chēng):To bromine tolueneCAS號(hào):106-38-7
西瑞香素英文名稱(chēng):DaphnoretinCAS號(hào):2034-69-7分子式:352.3分子量:C19H12O7
二磷酸鉀分子式:224.28分子量: C12H10KP英文名稱(chēng):Two phenyl potassium phosphateCAS號(hào):15475-27-1
性蘭英文名稱(chēng):Acid blueCAS號(hào):2379-74-0分子式:393.31分子量: C18H10Cl2O2S2
2,6-二氯-3-羥-4-吡甲醛分子式:192分子量: C6H3Cl2NO2英文名稱(chēng):2,6- two -3- hydroxy -4- pyridine formaldehydeCAS號(hào):185423-26-1
N-CBZ-4-乙酸-分子式:277.32分子量: C15H19NO4英文名稱(chēng):N-CBZ-4- - piperidine acetateCAS號(hào):63845-28-3
2-芐鹽酸鹽分子式:211.73分子量: C12H18ClN英文名稱(chēng):2- benzyl piperidine hydrochlorideCAS號(hào):
西尼羅河病毒(WNV)核酸檢測(cè)試劑盒方法Rabbit Anti-mouse IgG 兔抗小鼠IgG 1mg
SRC src原癌基因抗體 0.2ml
PACAP-38 腺苷酸環(huán)化酶激活肽-38抗體 0.1ml
Smad3 細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD3抗體 0.1ml
phospho-JunB(Ser79) 磷酸化活化蛋白激酶B抗體 0.1ml
MICS1 生長(zhǎng)激素誘導(dǎo)跨膜蛋白抗體(真皮乳頭源性蛋白2) 0.2ml
BCL2L12 BCL2樣12含脯氨酸蛋白抗體 0.2ml
SV2A 突觸泡蛋白2A抗體 0.2ml
C1ORF74 1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框74抗體 0.2ml
S100A11 S100鈣結(jié)合蛋白A11抗體 0.1ml
ZNF217 鋅指脂蛋白217抗體 0.2ml
LASS1 長(zhǎng)壽相關(guān)基因lASS1抗體 0.2ml