藍(lán)舌病病毒（BTV）核酸檢測試劑盒方法是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途。

藍(lán)舌病病毒(BTV)核酸檢測試劑盒方法使用及效果：
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子（約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm（或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中，95℃保溫10-15 分鐘，加入0.1 mL 溶液B，混勻，直接取上清液（相當(dāng)于PCR 體積的1/10）作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	分類
藍(lán)舌病病毒(BTV)核酸檢測試劑盒方法	48T	PCR檢測試劑盒

樣本采集、存放及運(yùn)輸：
1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（zui多凍融3次）；
3、運(yùn)輸：采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
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自備物品：
藍(lán)舌病病毒(BTV)核酸檢測試劑盒方法15毫升錐形離心管：用于制備樣品的容器
比色皿：用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板：用于比色的容器
分光光度儀：用于比色分析
酶標(biāo)儀：用于微量樣品比色分析
儲存條件：
14℃或－20℃
準(zhǔn)備物品
清理液（A）                                   毫升
染色液（t B）                                   微升
稀釋液（C）                                   毫升
溶解液（tD）                                   毫升
產(chǎn)品說明書                                   1份

乙氧氟草英文名稱：Ethylene oxide.CAS號：42874-03-3分子式：361.7分子量： C15H11ClF3NO4

4-硝吡唑-3-甲酸分子式：157.08分子量： C4H3N3O4英文名稱：4- nitro -3- formic acidCAS號：5334-40-7

3-丙甲分子式：134.22分子量： C10H14英文名稱：3- tolueneCAS號：1074-43-7

5-溴-4-氯-3-吲哚神經(jīng)氨英文名稱：5- -4- -3- - - -CAS號：160369-85-7分子式：559.72分子量： C19H21BrClN2O9Na

普拉西坦英文名稱：Placy StawCAS號：68497-62-1分子式：269.38分子量： C14H27N3O2

雙[4-(3-氧)]砜分子式：432.49分子量： C24H20N2O4S英文名稱：Bis [4- (3- amino group) phenyl]CAS號：30203-11-3

柴胡皂苷C英文名稱：Radix CCAS號：20736-08-7分子式：943.12分子量：C48H78O18

鎢酸鉀分子式：326.03分子量： K2WO4英文名稱：Potassium potassiumCAS號：7790-60-5

2--5-氟甲分子式：125.15分子量： C7H8FN英文名稱：2- amino -5- fluorideCAS號：4536

3-(4-硝)-5-甲-2-氯四氮唑分子式：317.73分子量： C14H12ClN5O2英文名稱：3- (4- nitrophenyl) -2- phenyl -5- methyl tetrazolium chlorideCAS號：zx3

3,6-二咔唑分子式：319.41分子量： C24H17N英文名稱：3,6- two phenyl carbazoleCAS號：56525-79-2

藍(lán)舌病病毒(BTV)核酸檢測試劑盒方法Rabbit Anti-chicken IgM/PE  PE標(biāo)記的兔抗雞IgM 0.1ml

Rabbit Anti-human IgG F(ab')2/FITC  FITC標(biāo)記的兔抗人IgG F(ab')2  0.1ml

CK15  細(xì)胞角蛋白15抗體 0.1ml

HIDE1/C19orfC38  19號染色體開放閱讀框38抗體 0.2ml

phospho-EGFR (Ser768)  磷酸化表皮生長因子受體抗體 0.1ml

CCDC28B  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白28B抗體 0.2ml

CD68  CD68抗體 0.1ml

phospho-GAP43(Ser41)  磷酸化神經(jīng)生長相關(guān)蛋白43抗體 0.1ml

Mouse Anti-Rabbit IgM/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的小鼠抗兔IgM 0.1ml

Phospho-Tuberin/TSC2(Ser540)  磷酸化結(jié)節(jié)性硬化蛋白抗體 0.1ml

Classical swine fever virus, CSFV  豬瘟病毒抗體 0.2ml

TdT/DNTT  末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶抗體 0.2ml

反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。