詳細(xì)介紹
反應(yīng)五要素:
猴痘病毒(MPV)核酸檢測(cè)試劑盒方法參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大小)或直徑約為0.5-0.7 cm(或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當(dāng)于PCR 體積的1/10)作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 分類(lèi) |
猴痘病毒(MPV)核酸檢測(cè)試劑盒方法 | 48T | PCR檢測(cè)試劑盒 |
樣本采集、存放及運(yùn)輸:
1、樣本采集:各類(lèi)型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h,-70℃以下可長(zhǎng)期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次);
3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
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自備物品:
猴痘病毒(MPV)核酸檢測(cè)試劑盒方法15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份
2-溴-5-甲吡分子式:172.02分子量: C6H6BrN英文名稱(chēng):2- -5- methyl pyridineCAS號(hào):3510-66-5
3,4-二氟三氟甲分子式:182.09分子量: C7H3F5英文名稱(chēng):3,4- three f two fCAS號(hào):32137-19-2
1,2,4,5-四氯分子式:215.89分子量: C6H2Cl4英文名稱(chēng):1,2,4,5- fourCAS號(hào):95-94-3
乙酸鉀分子式:98.14分子量: C2H3KO2; CH3COOK英文名稱(chēng):Potassium acetateCAS號(hào):127-08-2
4-炔丙硫代啉-1,1-二氧物分子式:173.23分子量: C7H11NO2S英文名稱(chēng):4- propargyl thiomorpholine -1,1- dioxideCAS號(hào):10442-03-2
4,5-二氮芴-9-酮(DAFO)英文名稱(chēng):4,5- two -9- (DAFO) n fluorene ketoneCAS號(hào):50890-67-0分子式:182.18分子量: C11H6N2O
丙氟靈英文名稱(chēng):Amino acrylicCAS號(hào):29091-21-2分子式:350.29分子量:C13H17F3N4O4
2,7-二溴咔唑分子式:分子量:英文名稱(chēng):2,7- dibromo carbazoleCAS號(hào):136630-39-2
剛果紅英文名稱(chēng):Congo redCAS號(hào):573-58-0分子式:696.66分子量: C32H22N6Na2O6S2
2--5-三氟甲吡分子式:162.11分子量: C6H5F3N2英文名稱(chēng):2- -5- threeCAS號(hào):74784-70-6
兒茶素英文名稱(chēng):ErCAS號(hào):154-23-4分子式:290.26806分子量:C15H14O6
猴痘病毒(MPV)核酸檢測(cè)試劑盒方法GNLY/NKG5 顆粒溶素抗體 0.1ml
C21orf55/DnaJC28 21號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框55抗體 0.2ml
RND3/RHOE Rho家族GTP酶3抗體 0.1ml
ANKRD40 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白40抗體 0.2ml
FANCF 范可尼貧血相關(guān)蛋白F抗體 0.2ml
HDHD2B/LHPP HDHD2B蛋白抗體 0.2ml
lamin A/C 核纖層蛋白A抗體 0.1ml
Phospho-NMDAR2B (Ser1480) 磷酸化谷氨酸受體2B抗體 0.1ml
Rabbit Anti-horse IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗馬IgG 0.1ml
Rabbit anti-chicken IgM whole serum 兔抗雞IgM抗血清 1ml
C10orf30/BEND7 10號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框30抗體 0.2ml
F-Actin 纖維狀肌動(dòng)蛋白抗體 0.1ml