詳細(xì)介紹
反應(yīng)五要素:
麻風(fēng)桿菌(ML)核酸檢測(cè)試劑盒方法參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm(或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當(dāng)于PCR 體積的1/10)作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 分類(lèi) |
麻風(fēng)桿菌(ML)核酸檢測(cè)試劑盒方法 | 48T | PCR檢測(cè)試劑盒 |
樣本采集、存放及運(yùn)輸:
1、樣本采集:各類(lèi)型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h,-70℃以下可長(zhǎng)期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次);
3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
?
自備物品:
麻風(fēng)桿菌(ML)核酸檢測(cè)試劑盒方法15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份
6201擔(dān)體英文名稱(chēng):6201 bodyCAS號(hào):分子式:分子量:
溴1-十二烷-3-甲咪唑分子式:331.33分子量: C16H31BrN2英文名稱(chēng):1- twelve alkyl -3-CAS號(hào):
1-甲-4-(4-二乙偶氮)吡鎓物分子式:396.28分子量: C16H21IN4英文名稱(chēng):1- methyl -4- (4- B two amino phenyl azo) pyridinium iodideCAS號(hào):74920-80-2
2-氯-5-乙酰吡分子式:155.58分子量: C7H6ClNO英文名稱(chēng):2- -5- acetyl pyridineCAS號(hào):55676-22-7
N-乙啉分子式:115.17分子量: C6H13NO英文名稱(chēng):N- ethyl morpholineCAS號(hào):100-74-3
1,3-雙[2-(4-)-2-丙]分子式:344.49分子量: C24H28N2英文名稱(chēng):1,3- bis -2- (4- amino phenyl) [2-CAS號(hào):2687-27-6
3-溴-4-甲氧甲分子式:201.06分子量: C8H9BrO英文名稱(chēng):3- methyl bromide -4-CAS號(hào):22002-45-5
(S,2S)-N,N'-雙(2-乙酰-3-氧代-2-亞丁)-1,2-二均*乙二胺合鈷分子式:573.6分子量: C32H38CoN2O4英文名稱(chēng):(S, 2S) -N, N'- (2- - acetyl -3- oxo -2- Ding Xiji) -1,2- two three tolyl ethylenediaminecobaltCAS號(hào):259259-80-8
1-溴-3,4,5-三氯分子式:260.34分子量: C6H2BrCl3英文名稱(chēng):1- three -3,4,5-CAS號(hào):21928-51-8
脫氫紫堇堿英文名稱(chēng):DehydrocorydalineCAS號(hào):30045-16-0分子式:366.437分子量:C22H24NO4
1-甲-4-氯分子式:133.62分子量: C6H12ClN英文名稱(chēng):1- methyl -4- chloro piperidineCAS號(hào):5570-77-4
麻風(fēng)桿菌(ML)核酸檢測(cè)試劑盒方法FAM164B FAM164B蛋白抗體 0.2ml
Phospho-CENP-A (Ser7) 磷酸化著絲粒蛋白A 0.1ml
Telomerase Binding Protein, P23 端粒酶結(jié)合蛋白P23抗體 0.1ml
PPARGC1A/PGC1 α 過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1α抗體 0.2ml
RHEB Ras蛋白腦組織同源類(lèi)似物RHEB蛋白抗體 0.1ml
Phospho-HSP90 alpha (Thr5/7) 磷酸化熱休克蛋白90α抗體 0.1ml
ADAMTS4 整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶4型抗體 0.1ml
RED/CSA2 軟骨肉瘤相關(guān)蛋白2抗體 0.2ml
DAAM1 形態(tài)發(fā)生紊亂關(guān)聯(lián)激活因子1抗體 0.1ml
GAK protein 細(xì)胞周期蛋白G相關(guān)激酶抗體 0.2ml
Phosphor-CBX5 磷酸化CBX5抗體 0.2ml
Caspase 14 半胱胺酸蛋白酶蛋白14抗體 0.2ml