詳細介紹
反應(yīng)五要素:
小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌(YE)核酸檢測試劑盒方法參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm(或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當(dāng)于PCR 體積的1/10)作為模板進行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌(YE)核酸檢測試劑盒方法 | 48T | PCR檢測試劑盒 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
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自備物品:
小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌(YE)核酸檢測試劑盒方法15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
長春地辛英文名稱:Changchun notesCAS號:53643-48-4分子式:753.93分子量:C43H55N5O7
M-甲氯鎂英文名稱:M- toluene based magnesium chlorideCAS號:121905-60-0分子式:150.89分子量: C7H7ClMg
4-羥-1-吡唑并[3,4-D]嘧分子式:212.21分子量: C11H8N4O英文名稱:4- hydroxy -1- phenyl [3,4-D]CAS號:21314-17-0
氟酮唑草分子式:412.19分子量: C15H14Cl2F3N3O3英文名稱:Herb of FCAS號:128639-02-1
3-氯-1,2,4-三唑分子式:103.51分子量: C2H2ClN3英文名稱:3- -1,2,4- threeCAS號:6818-99-1
五味子甲素英文名稱:A vegetarianCAS號:61281-38-7分子式:416.50728分子量:C24H32O6
2--6-氟并噻唑分子式:168.19分子量: C7H5FN2S英文名稱:2- -6- - amino benzothiazoleCAS號:348-40-3
1-甲-5-乙氧羰吡唑分子式:分子量: C7H10N2O2英文名稱:1- methyl -5- ethylCAS號:197079-26-8
N-丙咪唑分子式:108.14分子量: C6H8N2英文名稱:N- vinylCAS號:31410-01-2
1,2,4,5-四溴-3,6-二(五溴氧)分子式:1366.85分子量: C18Br14O2英文名稱:1,2,4,5- four -3,6- two (five bromo methoxy benzene bromobenzene)CAS號:58965-66-5
4-芐-2-氯甲啡啉分子式:225.71分子量: C12H16ClNO英文名稱:4- -2- benzyl chloromethyl morpholineCAS號:40987-25-5
小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌(YE)核酸檢測試劑盒方法C2CD4C/NLF3 限局性核因子3抗體 0.2ml
SSTR4 生長抑素受體4抗體 0.1ml
ARHGAP32 Rho GTP酶激活蛋白32抗體 0.2ml
phospho-MAPK3(Tyr204) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶3抗體 0.1ml
FAM150A FAM150A蛋白抗體 0.2ml
PCGF1 表觀抑制因子Polycomb家族成員PCGFl蛋白抗體 0.2ml
Albumin(3F4) 人血清白蛋白單克隆抗體 0.1ml
Donkey Anti-rabbit IgG/FITC FITC標(biāo)記的驢抗兔IgG 0.3ml
Mouse Anti-Goat IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的小鼠抗羊IgG 0.1ml
Rabbit Anti-chicken IgG/Bio 生物素標(biāo)記的兔抗雞IgG 0.1ml
phospho-c-Abl(Ser735) 磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體 0.1ml
FBXO11 F-box蛋白家族FBXO11抗體 0.2ml