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詳細介紹
RPMI-1640 培養(yǎng)基
| 英文名稱 | RPMI-1640 |
| 規(guī)格 | 500ml |
| 貨號 | GOY-XP3091 |
RPMI 1640培養(yǎng)液是由Moor等研究成功的，最初為培養(yǎng)小鼠白血病細胞的需要而準備。開始的配方特別適合懸浮細胞的生長，主要針對淋巴細胞，后經(jīng)多次改良從RPMI 1630、1634，而至RPMI 1640。其組成較為簡單，但可以適應(yīng)很多種類細胞的生長。不僅腫瘤細胞，而且很多正常組織細胞可用RMPI 1640進行體外培養(yǎng)。實驗室一般將RPMI 1640作為實驗和細胞維持的基本培養(yǎng)液，目前RPMI 1640是應(yīng)用最為廣泛的培養(yǎng)基之一。
應(yīng)用：
1、用于人類白血病細胞懸浮液單層細胞培養(yǎng)。
2、用于疫苗企業(yè)病毒株的傳代培養(yǎng)供后續(xù)抗原的制備。
3、用細胞培養(yǎng)基礎(chǔ)液。
4、用于動物疫病病毒采樣及病毒分離和維持液的基礎(chǔ)液。
注意事項
僅限科研用。
培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。
| 儀器 | 試劑 | 耗材 |
| 離心機 | 胎牛血清（FBS） | 離心管（15ml、50ml） |
| 生物安全柜 | 無菌 1×PBS pH=7.2 | T-25 細胞培養(yǎng)瓶 |
| 電動移液器 | 0.25%+0.02%EDTA | 一次性無菌移液管（2ml、5ml、10ml） |
| CO2 培養(yǎng)箱 | 培養(yǎng)基（含血清） | 1.8mL 凍存管 |
| 倒置顯微鏡 | 凍存液：90%FBS+10%DMSO | 程序降溫盒 |
復蘇
1) 將恒溫水浴鍋中的水預熱到 37℃；
2) 準備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預熱；
3) 戴上護目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復蘇的細胞，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中
復溫晃動凍存管以提高復溫速率；
4) 將融化了的凍存管中的細胞吸入事先準備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；
5) 準備一個 T-25 培養(yǎng)瓶，寫上細胞名稱、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基；
6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入
CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。
傳代 （細胞傳代建議一傳二）
1) 當細胞匯合度達到 85%以上時，可進行傳代。
2) 在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內(nèi)的培養(yǎng)基；
3) 向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；
4) 向瓶內(nèi)加入消化液 1ml，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min；
5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管；
① 準備一個無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；
② 將消化下來的細胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細胞脫。
6) 1000rpm 離心 5min；
7) 準備兩個新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基。
8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細胞，將重懸后的細胞轉(zhuǎn)入 2 個 T-25 培養(yǎng)瓶，每個培養(yǎng)瓶各 1ml；
9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
凍存 （細胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）
1）~6）參照傳代步驟
7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中；
8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫；
9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。
| 人乳腺癌細胞帶紅色熒光MDA-MB-231+RFP(STR鑒定正確) | RNase噴霧清除劑 |
| 人卵巢癌細胞熒光素酶標記 SKOV3+luc (STR鑒定正確) | 表面RNase清除劑 |
| 人皮膚成纖維細胞Hs865.Sk(STR鑒定正確) | RNA長效保存液 |
| 人Burkitt’s淋巴瘤細胞熒光素酶RAJI+LUC(STR鑒定正確) | RNase抑制劑(小鼠源) |
| 綿羊肺成纖維細胞OAR-L1（種屬鑒定） | RNase抑制劑(人源) |
| B細胞淋巴瘤DOHH2(STR鑒定正確) | Oligo(dT)纖維素 |
| 人胃癌細胞SNU-16(STR鑒定正確) | 一站式miRNA柱式提取試劑盒 |
| 人多發(fā)性骨髓瘤細胞ARD(STR鑒定正確) | miRNA分離純化試劑盒(沉淀法) |
| 大鼠少突膠質(zhì)前體細胞系OLN-93（種屬鑒定） | 柱式病毒RNA提取試劑盒 |
| 小鼠急性骨髓性白血病-綠色+熒光素酶標記C1498-GFP+LUC | 柱式病毒RNA-DNA共提試劑盒 |
| 人食管鱗癌細胞KYSE-140(STR鑒定正確) | 一管式病毒RNA提取試劑盒 |
| 犬腎細胞 MDCK-II（種屬鑒定） | 柱式細菌RNA提取試劑盒 |
| 人惡性黑色素瘤細胞SK-MEL-2 (STR鑒定正確) | 柱式分枝桿菌RNA提取試劑盒 |
| 人小細胞肺癌細胞NCI-H196(STR鑒定正確) | 細菌RNA提取試劑盒 |
| 人肺支氣管癌細胞NCI-H1666(STR鑒定正確) | 植物RNA柱式提取試劑盒2.0 |
| 小鼠膠質(zhì)瘤細胞GL261（種屬鑒定） | 植物RNA柱式提取試劑盒 |
| 人慢性B細胞白血病細胞MEC-1(STR鑒定正確) | 藻類RNA柱式提取試劑盒 |
| 人急性淋巴母細胞白血病細胞MT-4(STR鑒定正確) | 植物RNA提取專用高鹽溶液 |
| 小鼠肝癌細胞帶熒光素酶Hepa 1-6+LUC(種屬鑒定) | 血液RNA柱式提取試劑盒 |
| 人甲狀腺癌細胞KHM-5M(STR鑒定正確) | 血清血漿游離RNA提取試劑盒 |
| 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞綠色熒光標記 RAW264.7+GFP（種屬鑒定） | RPMI-1640 培養(yǎng)基軟體動物RNA柱式提取試劑盒 |
| 高轉(zhuǎn)移人肝癌細胞MHCC97-H(STR鑒定正確) | 軟骨RNA柱式提取試劑盒 |
?無菌操作?：細胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進行，使用前需對超凈工作臺進行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱。實驗人員需更換工作服、鞋套，戴口罩、手套。
?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購買已滅菌產(chǎn)品。
?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清、緩沖液等試劑應(yīng)無菌、無污染，使用前需進行無菌檢測。不同細胞對培養(yǎng)液成分要求有差異，應(yīng)按細胞類型選擇合適培養(yǎng)液。
?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動物細胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應(yīng)控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量，細胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右。
?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)、生長狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化。
?定期檢測?：定期對細胞進行支原體、細菌、真菌等污染檢測。
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