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ACT-1 (人甲狀腺癌細(xì)胞)培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

           1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

           2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

           3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

           1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入

           37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移

           入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合

           均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，

           加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入

           含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液

           并檢查細(xì)胞密度。2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，

           即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

           方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。