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植物乙酰輔酶A羧化酶合成酶（ACC）ELISA試劑盒使用方法
閱讀：174 發(fā)布時(shí)間：2019-2-19| 提 供 商 | 上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 17.6KB |
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| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 174次 |
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檢測(cè)原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被乙酰輔酶A羧化酶合成酶（ACC）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的乙酰輔酶A羧化酶合成酶（ACC）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因?yàn)榀B氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。
2. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行。
3. 植物萃取液或其它相關(guān)樣本：請(qǐng)1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)。
4. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
酶標(biāo)儀（450nm）
高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
37℃恒溫箱
植物乙酰輔酶A羧化酶合成酶（ACC）ELISA試劑盒操作注意事項(xiàng)
試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
濃度為0的S0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白；按照說明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍，zui終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。
嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱
96孔配置
48孔配置
備注
微孔酶標(biāo)板
12孔×8條
12孔×4條
無(wú)
標(biāo)準(zhǔn)品
0.3mL*6管
0.3mL*6管
無(wú)
樣本稀釋液
6mL
3mL
無(wú)
檢測(cè)抗體-HRP
10mL
5mL
無(wú)
20×洗滌緩沖液
25mL
15mL
按說明書進(jìn)行稀釋
底物A
6mL
3mL
無(wú)
底物B
6mL
3mL
無(wú)
終止液
6mL
3mL
無(wú)
封板膜
2張
2張
無(wú)
說明書
1份
1份
無(wú)
自封袋
1個(gè)
1個(gè)
無(wú)
注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、1、2、4、8、16 U/L
試劑的準(zhǔn)備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
植物乙酰輔酶A羧化酶合成酶（ACC）ELISA試劑盒操作步驟
從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
結(jié)果判斷
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。
試劑盒性能
1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。
2. 靈敏度：zui低檢測(cè)濃度小于0.1 U/L。
3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6個(gè)月
免責(zé)聲明
1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。
2. 嚴(yán)格按照說明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。