以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Etomoxir是一種有效的肉毒堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶(carnitine palmitoyltransferase-I,CPT-1)抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):124083-20-1 純度:99.40% 分子量:326.82 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
谷棒桿菌Ⅰ型纖維生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2抗體Human DCAF12L1 (DDB1- and CUL4-associated factor 12-like protein 1) ELISA KIT牛色b-245重鏈(CYBB)免疫試劑盒
意大利青霉肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白Fascin3抗體Human DDHD1 (Phospholipase DDHD1) ELISA KIT牛角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)免疫試劑盒
傳染性支氣管炎病結(jié)構(gòu)特異性核FEN1抗體Human CYBRD1 (Cytochrome b reductase 1) ELISA KIT牛維生D(VD)免疫試劑盒
小石地放線菌FAM61B蛋白抗體Human PGK1(PhosphoglyceRate kinase 1) ELISA Kit牛維生C(VC)免疫試劑盒
聚生殼菌FAM63A蛋白抗體Human DFNB31 (Whirlin) ELISA KIT牛維生B12(VB12)免疫試劑盒
大腸埃希氏桿菌上皮分泌型FAM3C蛋白抗體Human CYB5D1 (Cytochrome b5 domain-containing protein 1) ELISA KIT牛維生A(VA)免疫試劑盒
木樨草青霉FAM36A蛋白抗體Human DQX1 (ATP-dependent RNA helicase DQX1) ELISA KIT牛唾液(SA)免疫試劑盒
果生鏈核盤菌FAM50A蛋白抗體Human COA5 (Cytochrome c oxidase assembly factor 5) ELISA KIT牛褪黑(MT)免疫試劑盒
蟲(chóng)花棒束孢FAM134C蛋白抗體Human DAPK3 (Death-associated protein kinase 3) ELISA KIT牛銅鋅-過(guò)氧化物岐化(Cu/Zn-SOD)免疫試劑盒
大豆慢生根瘤菌凝溶膠蛋白家族Fli-1抗體Human DFNB31 (Whirlin) ELISA KIT牛銅藍(lán)蛋白(CP)免疫試劑盒
白色念珠菌-質(zhì)控菌乙型肝炎病X蛋白反轉(zhuǎn)錄蛋白9抗體Human PGK1(PhosphoglyceRate kinase 1) ELISA Kit牛甜菜堿-同型半胱S-甲基轉(zhuǎn)移1(BHMT)免疫試劑盒
羅氏鏈霉菌卵泡抑相關(guān)蛋白5抗體Human DQX1 (ATP-dependent RNA helicase DQX1) ELISA KIT牛胎盤生長(zhǎng)因子(PGF)免疫試劑盒
Bacillus anthracis叉頭相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子C2抗體Human CYB5D1 (Cytochrome b5 domain-containing protein 1) ELISA KIT牛羧化不全骨鈣(ucOC)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌Fbx15蛋白抗體Human DAPK3 (Death-associated protein kinase 3) ELISA KIT牛雙氫睪(DHT)免疫試劑盒
短桿菌屬FRMD2蛋白抗體Human MT-CO2 (Cytochrome c oxidase subunit 2) ELISA KIT牛瘦(LEP)免疫試劑盒
球孢白僵菌FAM98B蛋白抗體Human COA5 (Cytochrome c oxidase assembly factor 5) ELISA KIT牛生長(zhǎng)抑(SS)免疫試劑盒
: DSMZ40112=ATCC23905資源名稱: 菲律賓鏈霉菌 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)葉
: NRRL2452資源名稱: 東方諾卡氏菌 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品野黃芩
: JCM23043=ATCC9644=BCRC31588=BCRC31621=CBS170.60=DSM1960=IFO6345=JCM5593=NBRC6345資源名稱: 嗜松青霉 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品氧化前胡
CPT-1抑制劑(Etomoxir)尼索地平雜質(zhì)Ⅰ(2,6-二基-4-(2-基)-...英文名稱: Liranaftate碳化合物磺基轉(zhuǎn)移13抗體包裝250g
尼索地平雜質(zhì)Ⅱ(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Naproxen sodium碳化合物磺基轉(zhuǎn)移14抗體包裝50g
尼扎替?。?biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Naproxen sodium碳化合物磺基轉(zhuǎn)移2抗體包裝100g
鳥(niǎo)嘌呤 (標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Zidovudine碳化合物磺基轉(zhuǎn)移3抗體包裝25g
鳥(niǎo)嘌呤核苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Zidovudine碳化合物磺基轉(zhuǎn)移5抗體包裝500g
尿嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Nicorandil碳化合物磺基轉(zhuǎn)移6抗體包裝100mg
尿嘧啶核苷,尿苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Nicorandil染色質(zhì)修飾蛋白CHMP7抗體包裝25ml
尿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Nicotinic acid軟骨凝集蛋白CHODL抗體包裝1g
尿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Rifampicin膽囊收縮39抗體包裝100ml
檸檬,枸櫞一(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Rifampicin乙激α抗體包裝500ml
檸檬無(wú)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Epsilon Polylysine 陽(yáng)離子通道相關(guān)蛋白4抗體包裝5ml
牛磺膽鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Promestriene胞漿動(dòng)力蛋白中間鏈1抗體包裝100g
?;秦i去氧膽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bosentan hydrate胞漿動(dòng)力蛋白中間鏈2抗體包裝25g
紐甜;新特姆(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bosentan hydrate抑癌蛋白DKK3抗體包裝25g
諾沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fosaprepitant dimeglumine單克抗體包裝1g