以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
APD668是GPR119激動(dòng)劑,對(duì)人GPR119和大鼠GPR119的EC50分別為2.7nM和33nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):832714-46-2 純度:99.07% 分子式:C??H??FN?O?S 分子量:477.51 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
鞘單胞菌屬干擾epsilon 1蛋白抗體Human RMND5B ELISA KitStilbene(二乙烯)免疫試劑盒
葡萄座腔菌磷化KB抑制蛋白激γ抗體Human RNASE11 ELISA KitStanozolol(康力龍)免疫試劑盒
蘇云金芽胞桿菌庫(kù)爾斯塔克亞種磷化白介1受體1抗體Human RNASEH1 ELISA KitRat Ficolin-2(FCN2)免疫試劑盒
Marivirga tractuosa白介3抗體Human PDIA4(Protein disulfide-isomerase A4) ELISA KitRactopamine(萊克多巴)免疫試劑盒
蠟狀芽孢桿菌異戊烯焦磷1抗體Human RNASE13 ELISA KitQuinolones(喹諾類)免疫試劑盒
食樹(shù)脂新鞘菌磷化胰島受體底物-1抗體Human RNASEH2A ELISA KitPig Ficolin-2(FCN2)免疫試劑盒
光孢黃叢枝珊瑚菌磷化胰島受體底物-1抗體Human RIPK1(Receptor interacting serine/threonine kinase 1) ELISA KitPhenylbutazone(保泰松)免疫試劑盒
約利曼漆斑菌胰島誘導(dǎo)基因1抗體Human RIC8A ELISA KitMouse Ficolin-2(FCN2)免疫試劑盒
金黃色葡萄球菌金黃亞種FC段γ受體3/免疫球蛋白G Fc段受體III抗體Human RIC8B ELISA KitHuman Heat shock protein beta-6(HSPB6)免疫試劑盒
Pseudarthrobacter磷化白介-1受體相關(guān)激4抗體Human RIMKLB ELISA KitHuman cleaved microtubule-associated protein tau(C-MAPT/C-TAU)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌IQCF1蛋白抗體Human RIMS3 ELISA KitCorticosteroid(地塞米松)免疫試劑盒
副球菌屬IQCJ蛋白抗體Human RHPN1 ELISA KitClenbuterol(克倫特羅)免疫試劑盒
大腸埃希氏桿菌抑制結(jié)合蛋白抗體Human RHPN2 ELISA KitChloramphenicol(氯霉)免疫試劑盒
慢生根瘤菌免疫球蛋白超家族成員3抗體Human APOA1BP(Apolipoprotein A-I-binding protein) ELISA KitBovine Ficolin-2(FCN2)免疫試劑盒
杏鮑菇(13 )免疫球蛋白超家族成員6抗體Human RIBC2 ELISA KitBoldenone(寶丹)免疫試劑盒
大豆慢生根瘤菌免疫球蛋白超家族成員9抗體Human RIMS3 ELISA KitBeta Lactams(β-內(nèi)酰)免疫試劑盒
結(jié)核分枝桿菌Mycobacterium│tuberculosis 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)白術(shù)內(nèi)酯III
挪威假絲酵母Candida│norvegensis 質(zhì)量規(guī)格:>75.0%(GC)白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ
嗜熱鏈球菌Streptococcus│thermephilus 質(zhì)量規(guī)格:>92.0%(GC)白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ
GPR119激動(dòng)劑(APD668)CCL1/TCA3/I-309 嗜粒趨化蛋白CCL1抗體聚(烯共聚馬來(lái)) Mw ~216,000 to ~80,000, powder
CCL3/MIP-1 Alpha 巨噬炎性蛋白1α抗體四苯 99%
CCL4/MIP-1 Beta 巨噬炎性蛋白1β抗體軟脂 >99%(GC)
CCL5/RANTES T特異性趨化因子抗體苯三化錫 分析標(biāo)準(zhǔn)品
CCL6/C10 嗜粒趨化蛋白CCL6抗體苯三化錫 98%
CCL11/Eotaxin 1 嗜粒趨化蛋白抗體二二烯化銨/烯酰共聚物 10 wt. % in H2O
CCL12/MCP5 單核趨化蛋白5抗體對(duì)位紅 用于食品分析
CCL13/MCP-4 單核趨化蛋白4抗體巖芹 >99%(GC)