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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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更新時(shí)間：2022-04-21 10:12:00瀏覽次數(shù)：294
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 20次|50次 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | GOY-01X9536 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 公司產(chǎn)品僅供科研 | 英文名稱(chēng) | One?Step?TUNEL?Apoptosis?Assay?Kit |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：
中文名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
一步法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(綠色熒光)
| One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit | 20次|50次 | 1～3天 |
商品介紹：
本試劑盒提供了一種高靈敏度又快速簡(jiǎn)便的細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法。對(duì)于經(jīng)過(guò)固定和洗滌的細(xì)胞或組織，只要經(jīng)過(guò)一步染色反應(yīng)，洗滌后就可以通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)到呈現(xiàn)綠色熒光的凋亡細(xì)胞。本試劑盒足夠檢測(cè)20個(gè)樣品。 試劑盒組份： TdT酶——————————40μl 熒光標(biāo)記液————————960μl TdT酶稀釋液(選用)————500μl 細(xì)胞在發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時(shí)抽提DNA進(jìn)行電泳檢測(cè)，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder?；蚪MDNA斷裂時(shí)，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上綠色熒光探針熒光素(FITC)標(biāo)記的dUTP(fluorescein-dUTP)，從而可以通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，這就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的原理。注：FITC是fluorescein isothiocyanate的縮寫(xiě)，實(shí)際上大多數(shù)情況下所謂的FITC即為fluorescein。 本試劑盒有如下優(yōu)點(diǎn)。 (1)高靈敏度：背景染色極低，陽(yáng)性染色明亮，可以在單細(xì)胞水平檢測(cè)到細(xì)胞凋亡，同時(shí)由于凋亡早期就有DNA斷裂，可以檢測(cè)到早期的細(xì)胞凋亡。 (2)特異性：TUNEL檢測(cè)時(shí)通常更容易標(biāo)記凋亡細(xì)胞，而不容易標(biāo)記壞死細(xì)胞。 (3)快速：僅需約1-2個(gè)小時(shí)即可完成。 (4)方便：只需一步染色反應(yīng)，洗滌后即可觀察，不必使用二抗等進(jìn)行多步操作。 (5)應(yīng)用范圍廣：可以用于檢測(cè)冷凍或石蠟切片中的細(xì)胞凋亡情況，也可以檢測(cè)培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的凋亡情況。 TUNEL法特異性檢測(cè)細(xì)胞凋亡時(shí)產(chǎn)生的DNA斷裂，但不會(huì)檢測(cè)出射線(xiàn)等誘導(dǎo)的DNA斷裂(和細(xì)胞凋亡時(shí)的斷裂方式不同)。這樣一方面可以把凋亡和壞死區(qū)分開(kāi)，另一方面也不會(huì)把射線(xiàn)等誘導(dǎo)發(fā)生DNA斷裂的非凋亡細(xì)胞判斷為凋亡細(xì)胞。 極少數(shù)細(xì)胞凋亡時(shí)沒(méi)有DNA斷裂，此時(shí)不適用TUNEL法檢測(cè)。在個(gè)別類(lèi)型的壞死細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)TUNEL檢測(cè)呈陽(yáng)性。在需要嚴(yán)格判斷細(xì)胞凋亡的情況下，好同時(shí)檢測(cè)多個(gè)凋亡指標(biāo)。 儲(chǔ)存條件：-20℃。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無(wú)菌去離子水）。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái)，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)）。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè)：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
細(xì)胞周期D2(Cyclin-D2)英文名稱(chēng)：Cyclin-D2 ELISA KitAICAR?；D(zhuǎn)移抗體包裝5MG
細(xì)胞周期D1(Cyclin-D1)英文名稱(chēng)：Cyclin-D1 ELISA Kit磷化毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體包裝1g
細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子3(SOCS-3)英文名稱(chēng)：SOCS-3 ELISA KitATP5E蛋白抗體包裝250mg
細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子1(SOCS-1)英文名稱(chēng)：SOCS-1 ELISA KitATP5G2蛋白抗體包裝25g
細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激(ERK)英文名稱(chēng)：ERK ELISA KitATP6V0D2蛋白抗體包裝5g
C(Cyt-C)英文名稱(chēng)：Cyt-C ELISA KitATP6V1B2蛋白抗體包裝1g
細(xì)胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)英文名稱(chēng)：CYFRA21-1 ELISA KitATPIF1蛋白抗體包裝5g
細(xì)胞角蛋白18-M65(CK 18-M65)英文名稱(chēng)：CK 18-M65 ELISA KitAttractin蛋白抗體包裝10mg
細(xì)胞角蛋白18-M30(CK 18-M30)英文名稱(chēng)：CK 18-M30 ELISA Kit磷化有絲分裂激B抗體包裝50mg
細(xì)胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)英文名稱(chēng)：ICAM-3/CD50 ELISA Kit肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白M1抗體包裝100mg
細(xì)胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)英文名稱(chēng)：ICAM-2/CD102 ELISA KitALKB蛋白抗體包裝1g
細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)英文名稱(chēng)：ICAM-1/CD54 ELISA Kit乙酰酰基轉(zhuǎn)移1抗體包裝5g
細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(CTLA-4/CD152)英文名稱(chēng)：CTLA-4/CD152 ELISA Kit磷化β-肌動(dòng)蛋白抗體包裝250g
硒蛋白M(SELM)英文名稱(chēng)：SELM ELISA Kit磷化腎上腺能受體β2/β2-AR 抗體包裝25g
戊糖(Pentosidine)英文名稱(chēng)：Pentosidine ELISA Kit磷化腎上腺能受體β2/β2-AR抗體包裝5g
激活受體相互作用蛋白1抗體白介6(IL6)RTA-408 是一種抗氧化炎癥調(diào)節(jié)劑 (AIM)，可激活 Nrf2 并抑制一氧化氮 (NO)。RTA-408 通過(guò)抑制 STING 依賴(lài)的
一步法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(綠色熒光)黑紫紅菇 間羥基苯酮Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激酶1檢測(cè)試劑盒
葡萄座腔屬 三氟酮酸甲酯Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激酶2檢測(cè)試劑盒
傳染性喉氣管炎病 1-[2-氨基-1-(4-甲氧基苯基)乙基]環(huán)己鹽酸鹽Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激酶5檢測(cè)試劑盒
齒雙歧桿 1,8-萘內(nèi)酰亞RNA結(jié)合基序蛋白6檢測(cè)試劑盒
枯草芽孢桿 N-Fmoc-L-天冬氨酸-1-叔丁酯RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄終止因子Ⅰ檢測(cè)試劑盒
副豬嗜血桿 1,1'-二茂鐵甲酸R-脊椎蛋白2檢測(cè)試劑盒
糞產(chǎn)堿糞亞種 3-甲硫基苯酸S100A11鈣結(jié)合蛋白檢測(cè)試劑盒
小孢根霉華變種 敵百畝/二甲基二硫代氨酸鈉二水合物S100A12鈣結(jié)合蛋白檢測(cè)試劑盒
根瘤 二茂鐵甲S100A14鈣結(jié)合蛋白檢測(cè)試劑盒
嗜熱脂肪地芽孢桿 蔗糖酯S100鈣結(jié)合蛋白B檢測(cè)試劑盒
枯草芽孢桿 氨魯米特S-100蛋白檢測(cè)試劑盒
矩圓黑盤(pán)孢 十四烷酸乙酯S100鈣結(jié)合蛋白A8;A9復(fù)合物檢測(cè)試劑盒
鮭色鎖擲酵母 間苯二異酸酯S100鈣結(jié)合蛋白A9檢測(cè)試劑盒
腸道致病性大腸埃希氏 3,5-二氟苯乙酮Salusinα蛋白檢測(cè)試劑盒
梭 膽堿SAX1蛋白檢測(cè)試劑盒
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