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TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(FITC)

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更新時間:2022-04-21 12:07:53瀏覽次數(shù):287

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 20T
貨號 GOY-01X9624 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
主要用途 公司產(chǎn)品僅供科研 英文名稱 TUNEL Apoptosis Detection Kit (FITC)
TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(FITC)公司*的產(chǎn)品:CD150/SLAM 信號淋巴活化分子CD150抗體四鈀鈉 98%
CD151/MER2/PETA-3 CD151抗體六代鉑鈉六水合物 Pt 34.0%
CD155/PVR 脊髓灰質(zhì)炎病受體抗體金鈉 金含量,48%
CTLA-4/CD152 性T抗原-4抗體硫銠溶液 80g(Rh)/L水溶液
CTR1/Calcitonin r

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品屬性:

中文名稱:TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(FITC)

英文名稱:TUNEL Apoptosis Detection Kit (FITC)

產(chǎn)品規(guī)格:20T

發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

商品介紹:

本試劑盒應(yīng)用范圍廣,可以用于檢測冷凍或石蠟切片中的細(xì)胞凋亡情況,也可以檢測培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的凋亡情況。

細(xì)胞在發(fā)生凋亡時,會激活一些DNA內(nèi)切酶,這些內(nèi)切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測,可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder。

TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling)細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(FITC)可以用來檢測組織細(xì)胞在凋亡晚期過程中細(xì)胞核DNA的斷裂情況。其原理是在末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的作用下,在基因組DNA斷裂時暴露出的3′-羥基(3′-OH)末端摻入FITC-12-dUTP,從而可以用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測。

本試劑盒對標(biāo)記反應(yīng)進行了優(yōu)化,采用佳比例的FITC-12-dUTP和未標(biāo)記dNTP進行3’-OH末端的核苷酸摻入,使得同一個斷裂的DNA片段末端可以形成更長的“標(biāo)記尾巴"。該“標(biāo)記尾巴"減少了相鄰摻入dNTP上標(biāo)記基團的空間位阻,增加每個斷裂片段上的熒光基團數(shù)目,降低熒光基團相鄰后可能造成的聚集和淬滅,從而提高檢測靈敏度,減少非特異性反應(yīng)。

試劑盒組份:

5×Equilibration Buffer————750μl

FITC-12-dUTP Labeling Mix———100 μl

Recombinant TdT Enzyme—————20 μl

Proteinase K (2 mg/ml)————40 μl

DNase I (1 U/μl)———————5μl

10×DNase I Buffer——————100 μl

儲存條件:-20℃,有效期一年。

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面:

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達的研究;

②生物膜與細(xì)胞器的研究;

③細(xì)胞骨架體系的研究;

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);

⑦細(xì)胞的起源與進化;

⑧細(xì)胞工程.

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

生長分化因子11(GDF11)英文名稱:GDF11 ELISA Kit胞苷尿苷鳥苷結(jié)合蛋白1抗體包裝1g

生長分化因子1(GDF1)英文名稱:GDF1 ELISA Kit原腸胚雙向形成相關(guān)蛋白抗體包裝5g

滲透性糖蛋白(Pgp)英文名稱:Pgp ELISA Kit分裂周期蛋白CDC123抗體包裝100g

腎足蛋白(NPHN)英文名稱:NPHN ELISA Kit神經(jīng)蠟樣質(zhì)脂褐質(zhì)沉積病蛋白CLN3抗體包裝25g

腎臟腦蛋白(KIBRA)英文名稱:KIBRA ELISA Kit趨化樣因子超家族成員3抗體包裝100ml

腎損傷分子1(Kim1)英文名稱:Kim1 ELISA Kit染色質(zhì)修飾蛋白1B抗體包裝25ml

(REN)英文名稱:REN ELISA Kit冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白抗體包裝5ml

腎上腺能受體β3(ADRβ3)英文名稱:ADRβ3 ELISA Kit連接相關(guān)蛋白1抗體包裝25g

腎上腺能受體β2(ADRβ2)英文名稱:ADRβ2 ELISA Kit連接相關(guān)蛋白2抗體包裝5g

腎上腺能受體β1(ADRβ1)英文名稱:ADRβ1 ELISA Kit磷化周期依賴性激5抗體包裝250mg

腎上腺能受體α1A(ADRα1A)英文名稱:ADRα1A ELISA Kit異戊烯半胱羧基轉(zhuǎn)移抗體包裝1g

神經(jīng)源3(NEUROG3)英文名稱:NEUROG3 ELISA Kit鳥嘌呤核苷交換因子CLLD7抗體包裝5g

神經(jīng)元正五聚蛋白Ⅰ(NPTX1)英文名稱:NPTX1 ELISA Kit趨化樣因子超家族成員4抗體包裝25g

神經(jīng)元特異性烯化(NSE)英文名稱:NSE ELISA Kit趨化樣因子超家族成員7抗體包裝5g

神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT4)英文名稱:NT4 ELISA Kit趨化樣因子超家族成員5抗體包裝5g

蛹假交替單胞菌Pseudoalteromonas│undina 質(zhì)量規(guī)格:純度98%轉(zhuǎn)錄因子E2F1 紫莖女貞苷B;Ligupurpurosi

玫瑰色庫克菌Kocuria│roseus 質(zhì)量規(guī)格:純度大于98%,USPgrade轉(zhuǎn)錄因子AP-1 紫莖女貞苷A ;Ligupurpuros

小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:含量測定,HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品轉(zhuǎn)化生長因子-β誘導(dǎo)蛋白IG-H3試劑盒左旋肉堿; L(-)-Carnitine
TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(FITC) 5-甲基喹喔林信號3AElisa

腦膜膿性金黃桿 偏酸鎂信號4AElisa

異常漢遜酵母異常變種 甘氨酸鋁性別決定區(qū)Y框蛋白2Elisa

鏈格孢 蘋果?;?/span> 5-甲基-2-噻吩甲性結(jié)合球蛋白Elisa

釀酒酵母 四羥基二烷胸苷酸合成Elisa

橙色標(biāo)樁 磷酸三(1,3-二氯異基)酯胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子Elisa

平菇 L-3-苯基乳酸甲酯胸腺嘧啶核苷磷酸化Elisa

大腸埃希氏 2-甲巰基苯并噁唑胸腺β4Elisa

雙孢蘑菇 3-溴-4-氯苯酚胸腺β4樣蛋白3Elisa

紙葡萄穗霉 2-溴-5-氯苯酚胸腺肽α1Elisa

乳酸乳球乳亞種 3,5-二氯吡啶-4-甲雄烯二酮Elisa

芽孢桿屬 1,1-環(huán)基亞磺酸酯嗅質(zhì)蛋白4Elisa

雙通道計時定時器  2-乙基己酸鋅, Zn, contains 1% diethylene glycol monomet溴脫氧核苷尿嘧啶Elisa

Pseudomonas taiwanensis 1,5-二甲基-2-硝基亞氨基六氫-1,3,5-三血管活性腸肽Elisa

友好戈登氏 二乙基已酸鈣血管緊張1-7Elisa 

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

 


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