商品介紹:
KN-62是一種有效的選擇性的鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶II(CaMK-II)抑制劑,IC50為0.9μM,在HEK293細(xì)胞中,KN-62也非競爭性拮抗P2X7受體,IC50約為15nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):127191-97-3 純度:98.45% 分子式:C??H??N?O?S? 分子量:721.84 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
蜜二糖假絲酵母HOOK1蛋白抗體Human STARD10 ELISA Kit大鼠疊氮胸苷(AZT)免疫試劑盒
黑木耳人類免疫缺陷病2型/2型艾滋病病gp41+gp160抗體Human ST7L ELISA Kit大鼠凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌人類免疫缺陷病2型/2型艾滋病病gp41+gp160抗體Human ST6GALNAC1 ELISA Kit大鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)免疫試劑盒
平田頭菇6-2HCG3蛋白抗體Human ST7 ELISA Kit大鼠凋亡相關(guān)因子(FAS)免疫試劑盒
淺灰鏈霉菌HER4抗體Human FZD3(Frizzled-3) ELISA Kit大鼠淀粉樣前體蛋白(βAPP)免疫試劑盒
鴨肝炎病肝結(jié)合性表皮生長因子抗體Human SSU72 ELISA Kit大鼠抵抗樣α(Retnla)免疫試劑盒
麥克默多生孢八疊球菌肺癌相關(guān)蛋白8抗體Human SRPK1 ELISA Kit大鼠抵抗(Resistin)免疫試劑盒
球形芽孢桿菌型肝炎病NS5A抗體Human SRPR ELISA Kit大鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)免疫試劑盒
短芽孢桿菌組蛋白H2AX抗體Human BCL6B(B-cell CLL/lymphoma 6 member B protein) ELISA Kit大鼠低密度脂蛋白受體(LDLR)免疫試劑盒
水單胞菌同源結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子HESX1抗體Human SPOCD1 ELISA Kit大鼠低密度脂蛋白免疫復(fù)合物(LDL-IC)免疫試劑盒
紅曲霉同源結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子HESX1抗體Human SPTBN1 ELISA Kit大鼠低密度脂蛋白膽固(LDL-C)免疫試劑盒
Tardiphaga同源盒蛋白HOX13抗體Human SPOCK1 ELISA Kit大鼠低密度脂蛋白(LDL)免疫試劑盒
Phytophthora syringoe同源盒轉(zhuǎn)錄因子8抗體Human SPTBN2 ELISA Kit大鼠的牛血清白蛋白殘留檢測免疫試劑盒
草菇人絨毛膜促性腺激β亞基單抗Human SSTR5 ELISA Kit大鼠蛋白磷(PP)免疫試劑盒
梭孢環(huán)柄菇人類狀瘤病18 E6抗體Human SPPL2A ELISA Kit大鼠蛋白聚糖4(PRG4)免疫試劑盒
Bacillus humi 人類狀瘤病16-E7抗體Human HDAC8(Histone deacetylase 8) ELISA Kit大鼠蛋白激G(PKG)免疫試劑盒
干酪乳桿菌假植物亞種Lactobacillus│casei subsp .pseudoplantarum 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.0%(GC)山柰酚-3-O-蕓香糖苷
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析鴨腳樹葉堿
植物乳桿菌Lactobacillus│plantarum 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.8%(GC)表木栓
CaMK-II抑制劑(KN-62)Aggrecan1/ADAMTS-4 軟骨蛋白聚糖抗體檸檬 一水 ≥99.9998% metals basis
Aggrecan2/ADAMTS-5 軟骨蛋白聚糖抗體松弛B 98%
Agrin 聚集蛋白抗體葉綠b 95%
Angiotensin II type 1A receptor 血管緊張Ⅱ1A型受體抗體4-苯 分析標(biāo)準(zhǔn)品
Aryl Hydrocarbon Receptor/AHR 芳香烴受體抗體1-(4-)鹽鹽 95%
AIF 調(diào)亡誘導(dǎo)因子抗體苯膽固酯 98%
AIF 調(diào)亡誘導(dǎo)因子抗體1-(2-苯) 99%
AIMP2 AIMP2抗體橘霉 98%