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Caspase-3活性測定試劑盒

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更新時間:2022-04-21 14:11:08瀏覽次數(shù):261

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 20T|50T|100T
貨號 GOY-01X9738 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
主要用途 公司產(chǎn)品僅供科研 英文名稱 Caspase-3 Activity colorimetric assay Kit
Caspase-3活性測定試劑盒公司*的產(chǎn)品:JAM1/CD321 連接粘附分子1醋丁纖維 35-39%
p300/KAT3B 轉(zhuǎn)錄接頭蛋白EP300抗體醋丁纖維 44-50%
KCNA5 電壓閥門通道混合器相關(guān)亞家族成員5抗體醋丁纖維 50-54%
KCNG4/KV6.3 離子通道蛋白G蛋白4抗體2-氨-8-萘酚-6-磺 90%,工業(yè)級
KCNA7 電壓閥門通道混合器相關(guān)亞家族成

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品屬性:

中文名稱:Caspase-3活性測定試劑盒

英文名稱:Caspase-3 Activity colorimetric assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格:20T|50T|100T

發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

商品介紹:

本試劑盒適用于測定哺乳動物組織、細(xì)胞caspase-3活性。測定原理基于Caspase-3特異水解多肽底物acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide(Ac-DEVD-pNA),釋放硝基pNA。游離硝基pNA呈黃色在405nm具有大吸收峰,用普通可見光分光光度比色方法測定。根據(jù)pNA標(biāo)準(zhǔn)管吸光度OD值和標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算來自底物肽釋放的pNA濃度,得到Caspase-3水解活性。

Caspase-3是凋亡過程中主要的終末剪切酶,因而也是研究多的caspase,它激活pro-caspase-2,6,7,9等,特異水解多種凋亡關(guān)鍵蛋白如PARP,介導(dǎo)細(xì)胞核染色質(zhì)固縮、凋亡小體生成、核DNA斷裂。

運(yùn)輸及保存:試劑常溫運(yùn)輸。到達(dá)后按要求儲存,1年內(nèi)穩(wěn)定。

所需儀器:酶標(biāo)儀與96孔酶標(biāo)板;或可見光分光光度計配100μl容積的石英比色杯。

工作波長:大吸收波長405nm,如不具備也可在400~450nm范圍內(nèi)測定,但靈敏度略降。

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面:

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;

②生物膜與細(xì)胞器的研究;

③細(xì)胞骨架體系的研究;

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;

⑧細(xì)胞工程.

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

磺二嘧啶 (標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Oseltamivir phosphate 凝集蛋白家族11抗體包裝1g

磺二氧基嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Oseltamivir phosphate 銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體包裝5g

磺惡唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dibucaine HCl20號染色體開放閱讀框96抗體包裝25g

磺基嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Donepezil 3號染色體開放閱讀框26抗體包裝5g

磺氧噠(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Doripenem 粘附分子2抗體包裝25g

磺間二氧嘧啶鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Doripenem 耳聾-狀腺腫綜合征相關(guān)COBL蛋白抗體包裝5g

磺間氧嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Doxapram Hydrochloride20號染色體開放閱讀框195抗體包裝1g

磺脒(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Doxapram Hydrochloride7號染色體開放閱讀框62抗體包裝1g

磺嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Doxylamine succinate9號染色體開放閱讀框174抗體包裝1g

磺嘧啶鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Doxylamine succinate6號染色體開放閱讀框64抗體包裝25g

磺嘧啶銀(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Drospirenone免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ抗體包裝5g

磺噻唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Drospirenone透明質(zhì)介導(dǎo)游走受體抗體包裝1g

磺異噁唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ethiny Estradiol周期樣Y1抗體包裝5g

磺芐西林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ethiny Estradiol周期J抗體包裝100ml

磺草靈(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ethionamide周期L抗體包裝25g

小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR心肌肌鈣蛋白Ⅰ試劑盒吳茱萸內(nèi)酯;Evodine

地衣芽孢桿菌Bacillus│licheniformis 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BP協(xié)同激分子受體試劑盒五味子;Schisandrin C

鏈狀假絲酵母Candida│catenulata 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品小而密低密度脂蛋白試劑盒五味子乙;schisandrol B
Caspase-3活性測定試劑盒虎皮粘蓋牛肝 2-氨基-3-甲基-5-氯吡啶產(chǎn)幽門螺桿抗體IGGElisa

枯草芽孢桿 乙酰酮化鈰(III) 水合物二酰Elisa

松針散斑殼 醋酸氯己定琥珀酰Elisa

枯草芽孢桿 4-氟-2-(三氟甲基)溴芐傷寒IgM抗體Elisa

大腸埃希氏 異丁酸香蘭酯跨膜蛋白97Elisa

嚙蝕艾肯氏 5-溴-2-間二甲苯絲酸酮酸氨基轉(zhuǎn)移Elisa

星孢鏈霉 2,5-二氯肉桂酸胖Elisa

大腸埃希氏桿 4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯;4-甲基-5-乙氧羰基噻唑脂肪因子Elisa

凝結(jié)芽孢桿 D-焦谷氨酸叔丁酯1,3-Elisa

蘇云金芽孢桿 1-Boc-2-羥甲基哌1,2-Elisa

枯草芽孢桿 5-氯苯并噻吩核糖核酸LElisa

產(chǎn)氨棒桿 1-溴-4-異丁基苯甲血清白蛋白結(jié)合物Elisa

釀酒酵母 3-苯甲酰酸內(nèi)皮受體AElisa

紅球 D-葡糖酸-gamma-內(nèi)酯酮內(nèi)皮受體BElisa

挪威假絲酵母 4-異基芐氯Tafazzin蛋白Elisa 

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

 


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