以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
Nicotinamide是一種水溶性維生素,是輔酶NAD和NADP的活性組分,為PARP的抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:98-92-0 別名:Niacinamide;Nicotinic acid amide;Vitamin B3 純度:98.0% 分子式:C?H?N?O 分子量:122.12 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
Corynebacterium variabile磷化轉(zhuǎn)化生長因子β活化激結(jié)合蛋白1抗體Human HSF1(Heat shock factor protein 1) ELISA Kit酪酰tRNA合成(YARS)ELISA Kit
米根霉磷化轉(zhuǎn)化生長因子β活化激結(jié)合蛋白1抗體Human PDE5A(cGMP-specific 3′,5′-cyclic phosphodiesterase) ELISA Kit酪酰DNA磷二酯1(TDP1)ELISA Kit
薔薇放線孢磷化絲裂原活化蛋白激3抗體Human IFNGR1(Interferon gamma receptor 1) ELISA Kit酪羥化(TH)ELISA Kit
海洋青銅小單孢菌磷化絲裂原活化蛋白激激2抗體Human SOX2(Transcription factor SOX-2) ELISA Kit酪激2(Tyk-2)ELISA Kit
玫煙色棒束孢磷化肌特異性增強(qiáng)因子2D抗體Human SHBG(Sex hormone-binding globulin) ELISA Kit酪蛋白激受體TYRO3(TYRO3)ELISA Kit
大腸埃希氏菌磷化肌特異性增強(qiáng)因子2D抗體Human FGF5(Fibroblast growth factor 5) ELISA Kit狼瘡抗凝抗體(LAC/LA)ELISA Kit
赭色擲孢酵母磷化絲裂原活化蛋白激活化的蛋白激2抗體Human TAC1(Protachykinin-1) ELISA Kit蘭尼堿受體2(RYR2)ELISA Kit
廣東頸槽蛇菌磷化p38調(diào)節(jié)/激活蛋白激抗體Human HMGB1(High mobility group protein B1) ELISA Kit賴酰氧化(LOX)ELISA Kit
鹽地桿菌磷化p38調(diào)節(jié)/激活蛋白激抗體Human SHBG(Sex hormone-binding globulin) ELISA Kit賴特異性脫甲基5A(JARID1A)ELISA Kit
黑曲霉磷化造血祖激抗體Human FGF5(Fibroblast growth factor 5) ELISA Kit萊姆IgG(Lyme-IgG)ELISA Kit
微小桿菌p38調(diào)節(jié)/激活蛋白激抗體Human HMGB1(High mobility group protein B1) ELISA Kit醌NADH脫氫1(NQO1)ELISA Kit
小馬勃5-1肌特異性增強(qiáng)因子2D抗體Human FADS2(Fatty acid desaturase 2) ELISA Kit跨膜結(jié)構(gòu)域4亞家族成員11(MS4A11)ELISA Kit
英杜被孢霉磷化絲裂原活化蛋白激MAP4K4抗體Human MAX(Protein max) ELISA Kit空泡相關(guān)蛋白A(VacA)ELISA Kit
釀酒酵母磷化蛋白激C底物Marcks抗體Human APH1A(Gamma-secretase subunit APH-1A) ELISA Kit空腸彎曲菌黏附蛋白(PEB1)ELISA Kit
盤長孢狀盤孢髓易位基因相關(guān)蛋白1抗體Human TBX1(T-box transcription factor TBX1) ELISA Kit克雷白氏桿菌(klebsiella)ELISA Kit
淡紅擬口蘑巴德-畢德氏綜合征蛋白BBS6抗體Human PLA2G6(85 kDa calcium-independent phospholipase A2) ELISA Kit克拉拉蛋白(CC16)ELISA Kit
海莖狀菌Maricaulis│sp. 質(zhì)量規(guī)格:活1:250,BR蛇床子
: =ATCC6275=CBS131.52=IMI45551資源名稱: 泡盛曲霉 質(zhì)量規(guī)格:800u/mg原薯蕷皂苷
植物乳桿菌Lactobacillus│plantarum 質(zhì)量規(guī)格:2000u/mg;200萬u/g薯蕷皂苷
PARP抑制劑(Nicotinamide)Phospho-FAK (Tyr397) 化粘著斑激抗體溴酚紫 IND
Phospho-FAK (Tyr861) 化粘著斑激抗體溴酚紫 98%
Phospho-FAK (Tyr576/577) 化粘著斑激抗體溴酚綠鈉 AR
Phospho-FAK (Tyr925) 化粘著斑激抗體溴酚綠鈉 Indicator
Phospho-FAK (Tyr407) 化粘著斑激抗體酚紅 98%
phospho-FAK (Tyr577) 化粘著斑激抗體鄰酚酞 AR,溶
FAF1 Fas相關(guān)1因子抗體偶氮膦Ⅰ AR,顯色劑
phospho-FAK (Ser732) 化粘著斑激抗體鉻天青S AR