產(chǎn)品屬性:
中文名稱(chēng):mAChR激動(dòng)劑(Pilocarpine Hydrochloride)
英文名稱(chēng):Pilocarpine Hydrochloride
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|100mg|500mg
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹:
Pilocarpine鹽酸鹽是非選擇性毒蕈堿乙酰膽堿受體(mAChR)激動(dòng)劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):54-71-7 純度:99.92% 分子式:C??H??ClN?O? 分子量:244.72 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。
豇豆慢生根瘤菌高分子量神經(jīng)絲蛋白抗體Human FBLN2(Fibulin-2) ELISA Kit人抗菌肽(Att)ELISA Kit
檸條根瘤菌核因子/k基因結(jié)合核因子抗體Human FGG(Fibrinogen gamma chain) ELISA Kit人抗性磷5b(TRACP-5b)ELISA Kit
枯草芽孢桿菌低分子量神經(jīng)絲蛋白抗體Human VIP(VIP peptides) ELISA Kit人抗性磷(TRACP)ELISA Kit
蠟樣芽胞桿菌 (蠟狀芽胞桿菌)中分子量神經(jīng)絲蛋白抗體Human TNFRSF10A(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10A) ELISA Kit人抗抗體(AsAb)ELISA Kit
芽孢桿菌生長(zhǎng)抑制蛋白NDN抗體Human FGG(Fibrinogen gamma chain) ELISA Kit人抗角蛋白絲聚集/絲集蛋白抗體(AFA)ELISA Kit
鏈霉菌神經(jīng)生長(zhǎng)因子β抗體Human BCAM(Basal cell adhesion molecule) ELISA Kit人抗角蛋白抗體(AKA)ELISA Kit
廣食黃桿菌鼻咽癌相關(guān)基因6抗體Human VIP(VIP peptides) ELISA Kit人抗膠原蛋白抗體(CLA)ELISA Kit
糖化酵母鈉氫通道蛋白抗體Human CTGF(Connective tissue growth factor) ELISA Kit人抗甲狀腺微粒體抗體(ATMA/TMAB)ELISA Kit
青貯窖芽孢桿菌鈉氯離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體Human βEP(Beta-endorphin) ELISA Kit人抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)ELISA Kit
枯草芽孢桿菌神經(jīng)元特異性烯化/γ 烯化抗體Human LRP2(Low-density lipoprotein receptor-related protein 2) ELISA Kit人抗甲狀腺過(guò)氧化物抗體(TPO-Ab)ELISA Kit
釀酒酵母神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-3前蛋白抗體Human BMPR1A(Bone morphogenetic protein receptor type-1A) ELISA Kit人抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)ELISA Kit
枯草芽孢桿菌核受體相關(guān)因子-1抗體Human CD86(T-lymphocyte activation antigen CD86) ELISA Kit人抗肌聯(lián)蛋白抗體(TTN)ELISA Kit
釀酒酵母核因子2相關(guān)因子2抗體Human CXCR1(C-X-C chemokine receptor type 1) ELISA Kit人抗肌動(dòng)蛋白抗體(AAA)ELISA Kit
頂青霉神經(jīng)纖毛蛋白1抗體Human C3(Complement C3) ELISA Kit人抗黃體生成抗體(Anti LH Ab)ELISA Kit
扣囊復(fù)膜孢酵母神經(jīng)生長(zhǎng)因子4/5抗體Human LPA(Lipoprotein a) ELISA Kit人抗環(huán)胍肽抗體(CCP)ELISA Kit
黑紫紅菇巢蛋白NID2抗體Human CP(Ceruloplasmin) ELISA Kit人抗環(huán)瓜肽抗體(CCP)ELISA Kit
桔綠木霉Trichoderma citrinoviride Bissett 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR咖啡
平田頭菇Agrocybe│pediades (Fr.) Fayod 質(zhì)量規(guī)格:BR,>7U/MG, powder氧化苦參堿
白馬勃Calvatia│candida (Rostk.) Hollós 質(zhì)量規(guī)格:活力≥30000u/g苦參堿
mAChR激動(dòng)劑(Pilocarpine Hydrochloride)FPRL1 脂氧受體1抗體鉍 99.999%,1-6mm
Measles virus fusion protein 麻疹病融合蛋白抗體鉍 99.9999%,1-6mm
TBX2/T-box2 血栓B2抗體(一種新發(fā)現(xiàn)的抑癌因)鉍粉 99.99% metals basis,200目
FSH receptor 促卵泡激受體抗體硫化鎘 99.999%
Follistatin 卵泡抑抗體鎘 99.999%,granular
FSP/Spastin 纖維母表面蛋白抗體碲化鎘 99.999%,5N
FSH 促卵泡激抗體碲化鎘 99.9999%,6N
FHIT 脆性組氨三聯(lián)體抗體銦 99.999%
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)