商品介紹:
IOWH-032是CFTR抑制劑,在T84和CHO-CFTR細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中IC50為1.01uM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1191252-49-9 別名:IOWH032 分子式:C??H??Br?N?O? 分子量:545.18 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
蠟樣芽胞桿菌乙肝病衣殼蛋白抗體Human SHC ELISA Kit大鼠6前列腺F1a(6-keto-PGF1a)免疫試劑盒
黑曲霉型肝炎病1a基因型NS5蛋白抗體Human MUC20(Mucin-20) ELISA Kit大鼠6前列腺(6-K-PG)免疫試劑盒
三葉草根瘤菌戊型肝炎病抗體Human SHE ELISA Kit大鼠Ⅴ型膠原(Col Ⅴ)免疫試劑盒
灰肉色鏈霉菌HMG盒區(qū)內(nèi)含蛋白1抗體Human SH3PXD2A ELISA Kit大鼠5-羥色轉(zhuǎn)運(yùn)體(5-HTT/SERT)免疫試劑盒
桑帕約氏酵母血紅蛋白theta亞型1抗體Human SH3GL3 ELISA Kit大鼠5羥色(5-HT)免疫試劑盒
屎腸球菌hbs1樣蛋白抗體Human HAAO(3-hydroxyanthranilate 3,4-dioxygenase) ELISA Kit大鼠5羥基吲哚乙(5-HIAA)免疫試劑盒
蛹蟲(chóng)草*縮復(fù)合物亞型蛋白3抗體Human SH2D4A ELISA Kit大鼠5羥二十碳四烯(5-HETE)免疫試劑盒
鞘盒菌屬RNA結(jié)合蛋白39抗體Human SH3BGR ELISA Kit大鼠5'-核苷,胞膜(NT5E/CD73)免疫試劑盒
巨型艾美耳球蟲(chóng)全色C合成抗體Human SH2D5 ELISA Kit大鼠5核苷(5-NT)免疫試劑盒
葡萄座腔菌血紅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體Human SH3BGRL2(SH3 Domain Binding Glutamate Rich Protein Like 2 ) ELISA Kit大鼠5'-AMP活化蛋白激α-2催化亞基(PRKAA2)免疫試劑盒
金龜子綠僵菌小孢變種血紅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5抗體Human SH3BGRL3(SH3 domain-binding glutamic acid-rich-like protein 3) ELISA Kit大鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)免疫試劑盒
栗疫菌造血信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白抗體Human SH3BP1 ELISA Kit大鼠4-羥基壬烯(HNE)免疫試劑盒
魯杰氏菌鹵脫鹵樣水解域內(nèi)含蛋白1A抗體Human SH2D2A ELISA Kit大鼠Ⅲ型前膠原基末端肽(PⅢNP)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌E3連接抑制受體抗體Human SH2D3A ELISA Kit大鼠Ⅲ型前膠原基端肽(PⅢNT)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌His 結(jié)構(gòu)域內(nèi)含酪磷蛋白抗體Human SH2D3C ELISA Kit大鼠Ⅲ型前膠原C端肽(PⅢCP)免疫試劑盒
炭疽芽胞桿菌多聚腺苷因子Clp1蛋白抗體Human AKR1B10(Aldo-keto reductase family 1 member B10) ELISA Kit大鼠Ⅲ型前膠原(HPCⅢ)免疫試劑盒
根瘤菌(紫云英)Mesorhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品利卡靈-B
嗜熱脂肪地芽抱桿菌Geobacillus│stearothermophilus 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品去氫二異丁香酚
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,98.5%苷
CFTR抑制劑(IOWH-032)phospho-Ataxin-1(Ser775) 化失調(diào)癥蛋白1抗體葡萄糖 standard for GC, ≥99.5% (GC)
AVEN 凋亡、半胱蛋白激活抑制劑抗體葡萄糖 分析標(biāo)準(zhǔn)品
Kir6.2 ATP敏感性通道亞kir6.2抗體胰高血糖氫化物(人) ≥97.0% (HPLC)
AVPR2 精氨加壓受體2抗體羥萘酚藍(lán) IND,94%(HPLC)
Bdkrb2/B2R 緩激肽B2受體抗體蘇木精 高純級(jí),>99%(HPLC)
Axin1 軸蛋白1抗體蘇木精 Biological stain
Anei-ATX 自分泌運(yùn)動(dòng)因子抗體用于顯微鏡,>99.5%(HPLC),indicator (pH 5.0-6.0)
Aurora A 有絲分裂激A抗體N-羥二-N,N′,N′-三 AR,99.0%