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中腸腺壞死桿狀病毒PCR檢測試劑盒

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更新時間:2023-03-03 14:28:33瀏覽次數(shù):144

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
應(yīng)用領(lǐng)域 化工 主要用途 僅供科研實驗
英文名稱 Baculoviral Midgut Gland Necrosis Type Virus (BMNV 規(guī)格 50T
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豬鏈球菌型PCR檢測試劑盒
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詳細(xì)介紹

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操作流程
收集基因信息——>設(shè)計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細(xì)胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實物保存。4.png

產(chǎn)品名稱

英文名稱

規(guī)格

中腸腺壞死桿狀病毒PCR檢測試劑盒

Baculoviral Midgut Gland Necrosis Type Virus (BMNV)PCR

50T

PCR實驗方法步驟:
方法
1
:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix
2mM
4 μl    
引物110pM
2 μl    
引物210pM
2 μl     Taq
酶 (2U/μl
1 μl     DNA
模板(50ng-1μg/μl
1 μl      
ddH2O 50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2
:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93
預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93 40s → 58 30s → 72 60s,循環(huán)30-35次,在727min。
3
:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4
待電泳檢測或-20長期保存。
4
PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。

實時熒光定量PCR
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的:
1
Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性,即同一模板不同時間擴(kuò)增或同一時間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。
2
Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性定量方法,已得到,廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴(kuò)增(其中一個引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b
、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時,內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
c
、PCRELISA
利用di高辛等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛酶標(biāo)抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCRELISA法只是定性實驗,若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實現(xiàn)定量檢測目的。

操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4。
2.
設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL
3.
樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4.
除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37
水浴鍋或恒溫箱溫育60min
5.
棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6.
每孔加入底物A、B50μL,37
避光孵育15min產(chǎn)品僅用于科研實驗
7.
每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

下列是公司正在銷售的產(chǎn)品:
3T3-E1細(xì)胞,鼠胚成骨細(xì)胞 U937(組織細(xì)胞瘤) 山羊皮膚細(xì)胞;WGS1地拉羅司-d4Deferasirox-d4質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

EFNB2 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His 標(biāo)簽)N-去乙基舒尼替尼N-Desethyl Sunitinib質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

CW-2(結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 表皮角化細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105(1ml)N,N-二去乙基舒尼替尼鹽酸鹽N,N-Didesethyl Sunitinib 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

表皮色素細(xì)胞-中色素HEM-m舒尼替尼-d10Sunitinib-d10質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

CD86 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD86 / B7-2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照)13C,D2(主要的)FK-506-13C, D2 (Major)質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口

非色素睫狀上皮細(xì)胞 (HNPCEpiC)( 5×105 ) LX-2, 肝星形細(xì)胞株 Human大黃素(標(biāo)準(zhǔn)品)Emodin質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品

結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;HT-29大黃酸Rhein質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,BR

PFKFB3 Others Human  PFK2 / PFKFB3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 大黃酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Rhein質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品

CM-R014大鼠氣管和支氣管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL大黃酸-8-O-β-D-葡萄糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Rhein-8-O-β-D-glucopyranoside質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品

GBC-SD, 膽囊癌細(xì)胞 猴腎細(xì)胞,HepII細(xì)胞 TE 354.T(皮膚基底細(xì)胞癌)大薊苷Pectolinarin質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品
中腸腺壞死桿狀病毒PCR檢測試劑盒1175077-25-4  LYG-202  5mg  Mycobacterium paratuberculosis副結(jié)核分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 

117548-22-8  5(6)-FAM SE (5(6)-Carboxyfluorescein N-hydroxysuccinimide ester)  100mg  Mycobacterium marinum海魚分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 

117548-22-8  5(6)-FAM SE (5(6)-Carboxyfluorescein N-hydroxysuccinimide ester)  10mM*1mLinWater  Mycobacterium microti田鼠分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 

117548-22-8  5(6)-FAM SE (5(6)-Carboxyfluorescein N-hydroxysuccinimide ester)  50mg  Mycobacterium marinum海魚分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 

1175526-27-8  AM211 (AM211 free acid)  100mg  Mycobacterium kansasii堪薩斯分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

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