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熒光產(chǎn)生機(jī)理
    熒光是一種光致發(fā)光的冷發(fā)光現(xiàn)象。當(dāng)光照射到某些原子時(shí)，光的能量使原子核周?chē)囊恍╇娮佑稍瓉?lái)的軌道躍遷到了能量更高的軌道，即從基態(tài)躍遷到*激發(fā)單線態(tài)或第二激發(fā)單線態(tài)等。*激發(fā)單線態(tài)或第二激發(fā)單線態(tài)等是不穩(wěn)定的，所以會(huì)恢復(fù)基態(tài)，當(dāng)電子由*激發(fā)單線態(tài)恢復(fù)到基態(tài)時(shí)，能量會(huì)以光的形式釋放，所以產(chǎn)生熒光。另外，熒光是物質(zhì)吸收光照或者其他電磁輻射后發(fā)出的光。大多數(shù)情況下，發(fā)光波長(zhǎng)比吸收波長(zhǎng)較長(zhǎng)，能量更低。但是，當(dāng)吸收強(qiáng)度較大時(shí)，可能發(fā)生雙光子吸收現(xiàn)象，導(dǎo)致輻射波長(zhǎng)短于吸收波長(zhǎng)的情況發(fā)生。當(dāng)輻射波長(zhǎng)與吸收波長(zhǎng)相等時(shí)，既是共振熒光。
熒光參數(shù)   
    在葉綠素?zé)晒夥治鲋谐Ｓ玫臒晒鈪?shù)是初始熒光Fo、暗適應(yīng)后zui大熒光產(chǎn)量Fm、可變熒光Fv、zui大光化學(xué)效率Fv/Fm、光照下zui大熒光產(chǎn)量Fm"、給定光強(qiáng)下穩(wěn)態(tài)熒光Fs、光照下光系統(tǒng)II的有效量子產(chǎn)量Yield、光化學(xué)猝滅系數(shù)qP、非光化學(xué)猝滅系數(shù)qP和NPQ。在這里Fo是已經(jīng)暗適應(yīng)的光和機(jī)構(gòu)光系統(tǒng)II反應(yīng)中心均處于開(kāi)放時(shí)的熒光強(qiáng)度，它與所激發(fā)的強(qiáng)度和葉綠素濃度有關(guān)，而與光合作用的光反應(yīng)無(wú)關(guān)。Fm為充分暗適應(yīng)后的zui大熒光，是已經(jīng)暗適應(yīng)的光合機(jī)構(gòu)光系統(tǒng)II反應(yīng)中心全部關(guān)閉時(shí)的熒光強(qiáng)度，F(xiàn)v是熒光的可變部分，受耗散能量的途徑因素的影響。Fv/Fm是表明光化學(xué)反應(yīng)狀況的一個(gè)重要參數(shù)，反應(yīng)光系統(tǒng)II反應(yīng)中心的zui大光能轉(zhuǎn)換效應(yīng)。
葉綠素?zé)晒猬F(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)
    將暗適應(yīng)的綠色植物突然暴露在可見(jiàn)光下后，植物綠色組織發(fā)出一種暗紅色，強(qiáng)度不斷變化的熒光。熒光隨時(shí)間變化的曲線稱為葉綠素?zé)晒庹T導(dǎo)動(dòng)力學(xué)曲線。zui直觀的表現(xiàn)是，葉綠素溶液在透射光下呈綠色，在反射光下呈紅色的現(xiàn)象。其本質(zhì)是，葉綠素吸收光后，激發(fā)了捕光色素蛋白復(fù)合體，LHC將其能量傳遞到光系統(tǒng)2或光系統(tǒng)1，期間所吸收的光能有所損失，大約3%-9%的所吸收的光能被重新發(fā)射出來(lái)，其波長(zhǎng)較長(zhǎng)，即葉綠素?zé)晒狻?br />葉綠素?zé)晒猱a(chǎn)生的原理
   葉片是進(jìn)行光合作用的主要器官，葉綠體是進(jìn)行光合作用的主要細(xì)胞器。葉綠體是由葉綠體膜包裹起來(lái)的組織，膜內(nèi)主要含有基質(zhì)、基粒、類(lèi)囊體。葉綠體的光合色素主要集中在基粒之中，光能轉(zhuǎn)換為化學(xué)能的主要過(guò)程是在基粒中進(jìn)行的。
    在高等植物體內(nèi)含有光合色素包括葉綠素和類(lèi)胡蘿卜素兩種，一般情況下以3:1的比例存在于類(lèi)囊體的膜中。葉綠素分為葉綠素a和葉綠素b,類(lèi)胡蘿卜素分為胡蘿卜素和葉黃素。
    葉綠素不溶于水，而溶于有機(jī)溶劑。從化學(xué)性質(zhì)講，葉綠素是葉綠酸的產(chǎn)物，葉綠酸的兩個(gè)羥基分別被甲醇和葉綠醇酯化而得到的，對(duì)光、熱、酸敏感，能發(fā)生皂化反應(yīng)，性質(zhì)不穩(wěn)定。
    熒光產(chǎn)生的物理機(jī)制是斯托克斯位移，當(dāng)一定波長(zhǎng)的光子碰撞到葉綠素分子時(shí)，光子可能被分子吸收，使分子的能量升高，處于較高能態(tài)的分子是不穩(wěn)定的，一般要通過(guò)釋放吸收的能量而回到穩(wěn)定的基態(tài)即zui低能級(jí)，其中一部分將以輻射的形式回到基態(tài)。分子必須在吸收一定頻率范圍的激發(fā)光后，通過(guò)振動(dòng)馳豫回到*激發(fā)電子態(tài)的zui低能級(jí)，由此向下的輻射躍遷才可能產(chǎn)生熒光，因此熒光的波長(zhǎng)一般要比激發(fā)光的波長(zhǎng)要長(zhǎng)。
光合作用
    光合作用是指含葉綠素的植物細(xì)胞和細(xì)菌吸收光能，將無(wú)機(jī)物轉(zhuǎn)化為有機(jī)物并釋放氧氣的過(guò)程。他是高等植物從外界環(huán)境獲取能量的重要途徑，是高等植物進(jìn)行生命活動(dòng)的基礎(chǔ)。由綠色植物發(fā)射的葉綠素?zé)晒庖砸环N復(fù)雜的方式表達(dá)光合作用活性和行為。當(dāng)光子照射綠色植物的葉片時(shí)，光能在葉片的分配有反射、透射和吸收等三種主要的去激途徑。葉綠素分子吸收的光能除了大部分進(jìn)行光化學(xué)反應(yīng)外，少部分會(huì)以熱耗散和熒光的方式釋放出來(lái)。
   在植物光合作用過(guò)程中，葉綠素色素分子對(duì)光能的吸收及能量的轉(zhuǎn)變途徑中包括著極復(fù)雜的生物物理及生物化學(xué)過(guò)程。在葉綠體內(nèi)激發(fā)能從葉綠素b向葉綠素a的傳遞效率幾乎達(dá)到100%,所以檢測(cè)不到葉綠素b的熒光，因此，在對(duì)葉綠素?zé)晒膺M(jìn)行分析時(shí)，通常是指葉綠素a發(fā)出的熒光。
    光合作用過(guò)程中有兩種不同的光化學(xué)反應(yīng)，他們發(fā)生在相關(guān)聯(lián)的不同色素基團(tuán)中，這些基團(tuán)被稱為PSI和PSII。在常溫下，PSI色素系統(tǒng)基本不發(fā)熒光，接近95%的被檢測(cè)到的，葉綠素?zé)晒庑盘?hào)來(lái)源于PSII相關(guān)的葉綠素分子，因此，我們研究的葉綠素?zé)晒夤庾V主要由PSII相關(guān)葉綠素分子產(chǎn)生的。
葉綠素?zé)晒獾臏y(cè)量
     測(cè)量光閃，光源光源，能量極低，只能輕微的擾動(dòng)光合結(jié)構(gòu)的氧化還原能量極低，只能輕微的擾動(dòng)光合結(jié)構(gòu)的氧化還原狀態(tài)，而剛好不產(chǎn)生電子的分離與傳遞。
     典型光閃持續(xù)時(shí)間，典型光強(qiáng)，波長(zhǎng)，飽和光閃，光源，攜帶很高的能量，能夠一次翻轉(zhuǎn)所有活化攜帶很高的能量，能夠一次翻轉(zhuǎn)所有活化反應(yīng)中心的光化學(xué)狀態(tài)反應(yīng)中心的光化學(xué)狀態(tài)。
葉綠素?zé)晒夥治龇椒ǖ姆诸?lèi)
    葉綠素?zé)晒夥治龇ㄖ饕譃閮深?lèi)，一類(lèi)是研究熒光強(qiáng)度隨時(shí)間變化，即葉綠素?zé)晒庹T導(dǎo)動(dòng)力學(xué)；一類(lèi)是研究熒光強(qiáng)度在波長(zhǎng)空間范圍內(nèi)的變化，即葉綠素?zé)晒夤庾V分析法。
葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力學(xué)研究的特點(diǎn)
    葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力學(xué)特性包含著光合作用過(guò)程的豐富信息，光能的吸收和轉(zhuǎn)換，能量的傳遞與分配，反應(yīng)中心的狀態(tài)，過(guò)剩光能及其耗散，光合作用光抑制與光破壞。
    可以對(duì)光合器官進(jìn)行“無(wú)損傷探查”
    操作步驟簡(jiǎn)單快捷。
葉綠素?zé)晒鈨x的應(yīng)用
   可以做野外葉片研究，溫室培養(yǎng)，作物病害評(píng)估，環(huán)境評(píng)價(jià)，園藝學(xué)，農(nóng)學(xué)，林學(xué)，水生物學(xué)，毒理學(xué)，突變株篩選，遺傳育種等。