質(zhì)量控制:用于食品、藥品、環(huán)境等領(lǐng)域中與產(chǎn)氣莢膜梭菌相關(guān)檢測的質(zhì)量控制。可對檢測方法、培養(yǎng)基、試劑等進行質(zhì)量評估和驗證,如驗證培養(yǎng)基對產(chǎn)氣莢膜梭菌的生長支持能力、選擇性和特異性等。
方法驗證:在相關(guān)標準方法的驗證中,作為標準菌株確認檢測方法的準確性和可靠性,包括增菌、分離、鑒定等環(huán)節(jié)能否有效檢出產(chǎn)氣莢膜梭菌。
實驗室能力評估:幫助實驗室評估自身的檢測能力和操作水平,定期使用該菌株進行實驗,可及時發(fā)現(xiàn)實驗過程中存在的問題,以保證微生物檢測結(jié)果的質(zhì)量。
形態(tài)特征:革蘭氏陽性粗大桿菌,兩端鈍圓,單個或成雙排列,偶見鏈狀。無鞭毛,不能運動。在機體內(nèi)可產(chǎn)生明顯的莢膜,芽孢橢圓形,位于菌體中央或次極duan,芽孢直徑不大于菌體,在一般培養(yǎng)時不易形成芽孢,在無糖培養(yǎng)基中有利于形成芽孢。
培養(yǎng)特性:為厭氧菌,對厭氧程度的要求并不太嚴。在血平板上,多數(shù)菌株有雙層溶血環(huán),內(nèi)環(huán)完quan溶血,是由于 θ 毒素的作用,外環(huán)不完quan溶血則是由 α 毒素所致。在庖肉培養(yǎng)基中培養(yǎng)數(shù)小時即可見到生長,產(chǎn)生大量氣體,肉渣或肉塊變?yōu)槁詭Х凵?,但不被消化。生長適宜溫度為 37 - 47℃,多認為 43 - 47℃為最宜,在適宜條件下增代時間僅 8min。
通常采用西林瓶包裝,內(nèi)裝凍干粉。常見規(guī)格可能為 1 支 / 盒等,具體會因產(chǎn)品批次和銷售形式有所不同。
安瓿凍干和培養(yǎng)物菌種應(yīng)在 2 - 8℃保存。西林瓶請置于 - 20℃保存,避免反復(fù)凍融,以保持菌株的活性7。
復(fù)蘇:復(fù)蘇前應(yīng)準備適于該菌種生長的培養(yǎng)基和培養(yǎng)設(shè)備,所有操作均應(yīng)在符合生物安全保護及無菌條件下進行。啟開前,用 75% 酒精棉消毒西林瓶表面。在無菌條件下,打開西林瓶膠塞,加入復(fù)蘇液,將凍干菌種制成懸浮液,然后用無菌滴管或移液器吸取適量,移至非選擇性固體培養(yǎng)基平板或液體培養(yǎng)基上,按推薦的培養(yǎng)條件進行培養(yǎng)和傳代保存。
培養(yǎng)和傳代:產(chǎn)氣莢膜梭菌質(zhì)控菌種購買后應(yīng)在保質(zhì)期內(nèi)使用,復(fù)蘇后的菌種一般宜傳代 2 - 3 次后使用,菌種傳代 5 次后建議棄置。培養(yǎng)時需按照推薦的培養(yǎng)條件進行,一般為 36℃±1℃,48 - 72 小時厭氧培養(yǎng)。