質(zhì)量控制:用于食品、藥品、環(huán)境等領(lǐng)域中與艱難梭菌相關(guān)檢測的質(zhì)量控制??蓪z測方法、培養(yǎng)基、試劑等進(jìn)行質(zhì)量評估和驗(yàn)證,如驗(yàn)證培養(yǎng)基對艱難梭菌的生長支持能力、選擇性和特異性等。
方法驗(yàn)證:在相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)方法的驗(yàn)證中,作為標(biāo)準(zhǔn)菌株確認(rèn)檢測方法的準(zhǔn)確性和可靠性,包括增菌、分離、鑒定等環(huán)節(jié)能否有效檢出艱難梭菌。
實(shí)驗(yàn)室能力評估:幫助實(shí)驗(yàn)室評估自身的檢測能力和操作水平,定期使用該菌株進(jìn)行實(shí)驗(yàn),可及時發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)過程中存在的問題,以保證微生物檢測結(jié)果的質(zhì)量。
形態(tài)特征:革蘭氏陽性粗大桿菌,顯微鏡油鏡下可見紫色粗大桿菌,大小不一,可見卵圓形透亮芽孢,甚至可見鞭毛可位于菌體遠(yuǎn)端至尾端5。
培養(yǎng)特性:為嚴(yán)格厭氧菌,培養(yǎng)時需要創(chuàng)造嚴(yán)格的無氧環(huán)境,常用的培養(yǎng)基包括環(huán)絲氨suan - 頭孢西ding - 果糖瓊脂(CCFA)等。其培養(yǎng)過程相對較慢,通常需要 2-3 天甚至更長時間才能觀察到明顯的菌落生長,菌落通常較大、白色或淡黃色、邊緣不整齊,可能會產(chǎn)生一種類似于腐敗的氣味。
其他特性:艱難梭菌芽孢抵抗力十分強(qiáng)大,在體外有氧環(huán)境中仍可存活數(shù)周 - 數(shù)月,耐熱,在 100℃的溫度下需要 1 小時才能死亡,不耐干燥,不耐強(qiáng)酸強(qiáng)堿,對抗菌藥物高度耐藥,對乙醇敏感,醫(yī)院中許多消毒劑均能將其殺死。
通常采用西林瓶包裝,內(nèi)裝凍干粉。常見規(guī)格可能為 1 支 / 盒等,具體會因產(chǎn)品批次和銷售形式有所不同。
西林瓶請置于 - 20℃保存,避免反復(fù)凍融,以保持菌株的活性14。若為短期保存,也可在 2-8℃下存放14。
復(fù)蘇:復(fù)蘇前應(yīng)準(zhǔn)備適于該菌種生長的培養(yǎng)基和培養(yǎng)設(shè)備,所有操作均應(yīng)在符合生物安全保護(hù)及無菌條件下進(jìn)行。啟開前,用 75% 酒精棉消毒西林瓶表面。在無菌條件下,打開西林瓶膠塞,加入復(fù)蘇液,將凍干菌種制成懸浮液,然后用無菌滴管或移液器吸取適量,移至非選擇性固體培養(yǎng)基平板或液體培養(yǎng)基上,按推薦的培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)和傳代保存。
培養(yǎng)和傳代:艱難梭菌質(zhì)控菌種購買后應(yīng)在保質(zhì)期內(nèi)使用,復(fù)蘇后的菌種一般宜傳代 2-3 次后使用,菌種傳代 5 次后建議棄置。培養(yǎng)時需按照推薦的培養(yǎng)條件進(jìn)行,一般為 36℃±1℃,在厭氧環(huán)境下培養(yǎng) 48-72 小時。