您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)
7
產(chǎn)品簡介
HyClone南美胎牛血清生產(chǎn)主要步驟以及使用常見問題解說
詳細介紹
HyClone南美胎牛血清生產(chǎn)主要步驟以及使用常見問題解說
HyClone胎牛血清生產(chǎn)主要步驟：
HyClone胎牛血清生產(chǎn)主要步驟：
1.固定和麻醉
胎牛原血清采集的關(guān)鍵技術(shù)主要是懷孕母牛的剖腹產(chǎn)和太牛的全封閉無菌心臟穿刺采血，對懷孕8個月左右的母牛進行剖腹產(chǎn)，產(chǎn)前采用側(cè)臥保定方法固定。麻醉采取全身麻醉和術(shù)部局部麻醉相結(jié)合的方法，確實有效的麻醉師順利進行剖腹產(chǎn)的重要保障。
2.母牛剖腹，心臟穿刺
手術(shù)切口位置選擇在左肷窩腹壁的上三分之一處，優(yōu)點是靠近子宮角便于手術(shù)中縫合快速收縮的子宮，其次是內(nèi)容物不易流入腹腔，減少腹腔被污染而帶來腹，盆兩腔感染引發(fā)生殖系統(tǒng)器質(zhì)性病變的風險。因子宮收縮極快，故在胎牛取出的同時要快速縫合，然后進行心臟穿刺采血。
3.原血采集
采血前器具全部消毒，探明胎牛心臟搏動明顯部位，消毒后針管垂直穿刺心臟采血。
4.冷凍離心
將原血盡快放入冷凍離心機中3400r/min ,30min。收集血清，凍存。
5. 成品生產(chǎn)和定級
首先做好原血清解凍工作，26℃熱風均勻循環(huán)解凍然后0.1μm三次過濾，避免病原微生物的污染。此過程會對血清檢測和定級。全程在萬級到十萬級凈化車間完成。全程做好記錄，包括母牛資料，生產(chǎn)過程記錄和每只胎牛血清數(shù)量 以及容器編號。方便檢測和血清溯源。
6. 分裝貼標保存
成品血清分裝貼標后需迅速儲存在-20℃以下快速冷凍24小時以上。
1、 如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
將HyClone胎牛血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。
長時間儲存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復(fù)凍融。
我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。
2、血清中包含絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理?
沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀，離心血清(400g，1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以，使用產(chǎn)品時要搖動并加熱血清至37℃，沉淀會自然消失。
3、實驗室如何選擇適合的HyClone胎牛血清?
國內(nèi)*認為HYCLONE的血清是好的，但是根據(jù)我在北美的經(jīng)歷，國外一般認為GIBCO比HYCLONE好，所以并不是價格決定質(zhì)量，但是總的來說這兩種價格普遍偏貴，一般不是太嬌氣的細胞，國產(chǎn)的就夠用了。此外，由于國內(nèi)HYCLONE，GIBCO并沒有生產(chǎn)線，我們只能從代理商那里買，而代理商又魚龍混雜，所以買到假貨的可能性也很大。所以，我一般會從直銷員那里買血清，有的國外生物公司由于剛剛進入中國，度不高，但是其實在國外已經(jīng)做得很不錯了，如Wisent等，他們在國內(nèi)有辦事處，我會從那里拿，血清的品質(zhì)和HYCLONE不相上下，但價格相對優(yōu)惠很多。
4、 如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?
按如下操作可避免HyClone胎牛血清沉淀的產(chǎn)生：
(1)解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。
(2) 血清分裝凍存時，須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一。
(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。
(4) 勿將血清置于37℃太久，否則血清會變得渾濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞，從而影響血清的品質(zhì)。
(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。
(6) 若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。
5、 培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎?
一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。
6、 HyClone南美胎牛血清為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細胞、平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。
7、 有必要做熱滅活嗎?
實驗顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。
若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時間，更確保血清的質(zhì)量!
8、HyClone胎牛血清細胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點是污染嗎?如何處理?
一旦您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細胞生長的狀態(tài)，黑點是否游動。如果細胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。
如果在鏡下觀察細胞，生長狀態(tài)良好，與黑點出現(xiàn)前相比，沒有任何變化，那么，黑點的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：
(1)細胞生長過老，破碎的細胞殘骸;
(2)HyClone南美胎牛血清質(zhì)量不好，反復(fù)凍融的結(jié)果;
(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細胞生長;
(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格?？蓱?yīng)用離心、過濾的方法去除這些黑點;
(5)培養(yǎng)原代細胞中出現(xiàn)小黑點，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除。
9、 細胞培養(yǎng)中如何防止黑點生成?
(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù)。
(2) 培養(yǎng)基無需37℃水浴。
(3) 培養(yǎng)基保持PH值7.0- 7.2。
(4) 嚴格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定期刷洗。
(5) 掌握細胞傳代的時機，細胞切勿生長過老。
10、小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項?
來源不同：HyClone南美胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。
組份與比例不同：兩者所含的促細胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同，用途與用法不同：某些細胞必需胎牛血清才能生長，而有些細胞只需小牛血清即可，使用濃度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的濃度在20%。
血清保存和使用須注意：血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超過一個月。解凍血清時 ，應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱，并經(jīng)常搖勻使之溶解，然后至室溫放置使之升溫，不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中，如放在37℃解凍，顏色加深，粘稠度也會增加，血清在解凍和熱滅活后，應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存，避免反復(fù)凍融。